本发明公开了一种3型鸭甲肝病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测试剂盒及方法,所述试剂盒包括由核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物组成的引物对,以及核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的探针。采用本发明所述试剂盒可用于广泛检测3型鸭甲肝病毒,检测时间短,检测成本低,重复性好,灵敏度高;本发明检测的靶点具有单一特异性,提供的引物对和探针对不含目的基因的样品,均无扩增信号,具有良好的特异性;另外,引物对和探针检测RNA灵敏度分别可达48copies/μL,具有良好的灵敏度。
本发明公开了氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的鸭疱疹病毒1型(AHV-1)UL7截短重组蛋白,其编码基因,重组表达载体,工程菌,并利用工程菌制备该截短重组蛋白以及该截短重组蛋白的多克隆抗体;该截短重组蛋白具有与天然AHV-1UL7蛋白相似的免疫反应活性,能够与AHV-1抗体特异性结合,可作为检测AHV-1抗体的试剂应用,由于该截短重组蛋白非全细菌,应用其进行检测时无散毒危险,且制备方法简单,适于工业化大规模生产,能够实现产品的标准化,利于不同实验室之间的结果比较;该截短重组蛋白的多克隆抗体可作为检测AHV-1抗原的试剂,具有特异性好,与鸭肝炎病毒、雏鹅新型肠炎病毒不产生交叉反应,还可作为检测UL7蛋白在AHV-1感染宿主细胞中的定位和分布的试剂应用。
本发明公开了氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的鸭疫里默氏杆菌(RA)表面抗原D15截短重组蛋白,其编码基因、重组表达载体、工程菌、利用工程菌制备该截短重组蛋白的方法;该截短重组蛋白具有与天然D15蛋白相似的免疫反应活性,能够与RA抗体特异性结合,与其它6种常见毒株或菌株阳性血清不产生交叉反应,可作为检测RA全菌抗体的检测抗原应用,且由于该截短重组蛋白非全细菌,用其进行检测时无散毒危险;此外,该截短重组蛋白的制备方法简单,适于工业化大规模生产,能够实现产品的标准化,利于不同实验室之间的结果比较。
本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌(RA)表面抗原D15截短重组蛋白致敏乳胶试剂,为表面包被有氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的RA表面抗原D15截短重组蛋白的乳胶颗粒,该致敏乳胶试剂可通过乳胶凝集试验对RA抗体进行快速检测,且检测特异性、重复性和敏感性良好,可用于制备RA抗体检测试剂特别是RA抗体乳胶凝集检测试剂盒;本发明还公开了RA表面抗原D15截短重组蛋白致敏乳胶试剂的制备方法,并对偶联条件(如羧化乳胶偶联浓度、RA表面抗原D15截短重组蛋白偶联浓度、偶联时间、封闭液浓度等)进行了探索和优化,所建立的制备方法偶联效率高,产品凝集效果好。
本发明公开的是1型和3型鸭甲肝病毒一步法双重RT-PCR检测试剂盒、引物对及方法,引物对1由引物1和引物2组成,用于检测1型鸭甲肝病毒,它们的核苷酸序列分别依次为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的单链DNA;引物对2由引物3和引物4组成,用于检测3型鸭甲肝病毒,它们的核苷酸序列分别依次为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的单链DNA。一次RT-PCR反应就能同时检测1型鸭甲肝病毒和3型鸭甲肝病毒两种病原体的检测技术,避免了常规PCR的重复检测,具有低成本、高效率等优点,而且在引物设计上利用扩增片段长度的不同直接判定扩增结果,使得该方法在结果判定时更简便、直观和实用。
本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法,包括如下步骤:根据鸭疫里默氏杆菌基因组DNA序列中gyrB基因的保守序列SEQ ID NO:1设计扩增引物;提取样品DNA,PCR法扩增;凝胶电泳检测扩增产物,判断样品是否含有鸭疫里默氏杆菌;所述判断具体为:如果电泳结果出现相应的单一扩增条带,则说明样品中含有鸭疫里默氏杆菌;如果没有出现相应的单一扩增条带,则样品中不含该菌。采用本发明的检测方法检测鸭疫里默氏杆菌,检测时间短,成本底,检测结果特异,结果判定简单。