本发明提供的定量检测产气荚膜梭菌的方法,其包括以下步骤:(a)获得患者分泌物并提取其中细菌的基因组DNA;(b)以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2中的序列为引物,以SEQ ID NO:3的序列为探针,对步骤(a)中获得的DNA进行荧光定量PCR扩增;(c)制作CT值与所述产气荚膜梭菌的浓度之间的标准曲线,根据步骤(b)的扩增结果,对患者分泌物中的产气荚膜梭菌进行定量。本发明的方法具有高度的特异性、灵敏性和定量准确度,可以检出细菌或病毒的存在,全部检测过程在2-3小时内可以完成;最低可检出约10个细菌,定量误差小于5%,特异性和试剂稳定性等指标符合有关国家标准。而且,本发明利用荧光定量PCR方法,一次检测量可以达到96或384个样本。