本发明提供了一种反义RNA序列组合及其在生产败育罗非鱼中的应用,属于分子生物学与繁育生物学技术,所述反义RNA序列组合包括类固醇生成因子SF1‑1和SF1‑2的反义RNA;所述Anti‑SF1‑1‑I、Anti‑SF1‑1‑II、Anti‑SF1‑2‑I和Anti‑SF1‑2‑II的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1~SEQ ID No.4所示。本发明所述方法将反义RNA片段通过受精孔导入卵子,实现有效而精确的靶向干预调控基因的表达,操作简单,卵子损伤极小,成功率高,繁育后代表型稳定,具有极强的应用前景。