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[发明专利]共表达摄取转运体和药物代谢酶模型的构建及应用-CN201410066266.6有效
发明人：曾苏;赵垒;胡海红;余露山;蒋惠娣;周惠;徐思云 -专利权人：浙江大学
申请日： 2014-02-26 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供一种共表达摄取转运体和药物代谢酶模型的构建，以人基因OAT1cDNA为模板，扩增获得人OAT1基因片段，连接到载体pcDNA3.1(+)，获得质粒pcDNA3.1(+)/OAT1，转染MDCK细胞，经筛选得到高表达OAT1的MDCK-hOAT1细胞；然后将人CYP1A2基因片度连接到载体pcDNA3.1/Hygro(+)，获得质粒pcDNA3.1/Hygro(+)/CYP1A2，转染MDCK-hOAT1细胞，经潮霉素B筛选，得到共表达OAT1和CYP1A2细胞，再对细胞进行mRNA验证并通过经典底物及抑制剂进行功能验证。本发明的细胞模型可在基于OAT1和CYP1A2的药物毒性作用在细胞水平上筛选中的应用，可预测这两种蛋白对药物处置过程中的协同作用，为临床合理用药提供依据。本发明设计合理，重复性强。
表达摄取转运药物代谢模型构建应用

[发明专利]共转染药物代谢酶和转运体的细胞模型的构建及应用-CN201210006590.X无效
发明人：曾苏;刘瑶;胡海红;余露山;蒋惠娣;周慧;徐思云;王鹭;何新 -专利权人：浙江大学
申请日： 2012-01-10 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供一种共转染CYP3A4和MDR1细胞模型的构建，是先将P-gp的基因克隆到pcDNA3.1(+)上，转染MDCK细胞，经过G418筛选出单克隆细胞，得到MDCK-MDR1细胞株，然后将CYP3A4克隆到带有潮霉素B筛选标记的载体pcDNA3.1(+)/Hygro上，转染MDCK-MDR1细胞，经过潮霉素B筛选，得到共转染CYP3A4和MDR1细胞。MDCK-MDR1/CYP3A4被中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCCC2011119，保藏日期：2011年12月15日。本发明构建的模型，可用于模拟药物载肠道的吸收和代谢过程，进而筛选P-gp和CYP3A4共同底物。
转染药物代谢转运细胞模型构建应用

[发明专利]抑制CYP3A4的shRNA表达质粒及构建和应用-CN201210017177.3无效
发明人：曾苏;徐思云;余露山;蒋惠娣;周慧;胡海红;王鹭 -专利权人：浙江大学
申请日： 2012-01-19 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供抑制CYP3A4的shRNA表达质粒，根据干扰片段设计原则和CYP3A4的序列，通过Blast软件排除与基因组其他基因具有同源性的序列，获得三个符合要求的shRNA模板序列，将合成的上述shRNA模板分别克隆，通过氨苄抗性筛选和测序，成功获得三种shRNA表达质粒。在不同的细胞模型中，shRNA单独或混合表达质粒均能够较好地抑制CYP3A4mRNA表达(55％)和蛋白表达(50％)，且无脱靶效应，具有良好的专属性。因此，本发明提供的三种shRNA表达质粒可以作为CYP3A4的特异性抑制剂，用于CYP3A4底物和诱导剂的筛选和确证。
抑制 cyp3a4 shrna 表达质粒构建应用

[发明专利]一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法-CN200910015317.1有效
发明人：申恒海;徐振帅;白艳敏;丁军;邓磊;乔雪梅;徐思云;李文魁;杜树涛;王淑霞;张先艳;化春梅 -专利权人：山东众山生物科技有限公司
申请日： 2009-05-09 - 公布日： 2009-10-07 - 主分类号： C08B37/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法，属于化学工艺制备领域，发酵液直接经过乙醇沉淀、彻底脱水、溶解液中选择性加入活性炭过滤、超滤、乙醇沉淀、洗涤脱水干燥、成品包装而制得透明质酸钠，本发明具有步骤简单，成本较低，尤其是超滤技术适合大规模的工业化生产。
一种透明发酵制备质酸钠方法