本发明公开了罗汉果糖基转移酶突变体G193E‑G152T及其构建方法与应用。属于基因工程和酶工程技术领域。所述突变体G193E‑G152T的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明将野生型罗汉果糖基转移酶SgUGT94‑289‑3的氨基酸序列的193位点和152位点进行点突变,从而获得罗汉果糖基转移酶突变体G193E‑G152T。研究证明,该突变体在体外催化底物罗汉果苷ⅡE、Ⅲ和ⅢE生成罗汉果苷Ⅲ、罗汉果苷ⅣA和赛门苷Ⅰ的活性和生物合成效率显著提高,相对产率分别为野生型的2.8、2.6和2.9倍,具有重要的工业化生产应用价值。
本发明公开了罗汉果糖基转移酶突变体R192A及其构建方法与应用。属于基因工程和酶工程技术领域。所述突变体R192A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明将野生型罗汉果糖基转移酶SgUGT94‑289‑3的氨基酸序列的192位点处的氨基酸进行点突变,将精氨酸置换为丙氨酸,从而获得罗汉果糖基转移酶突变体R192A。研究证明,该突变体催化底物罗汉果苷ⅣA合成罗汉果苷Ⅴ的活性和生物合成效率显著提高,产物罗汉果苷Ⅴ的相对产率较野生型提升了5倍,可满足在工业化生产中的应用,具有重要的应用价值。