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[发明专利]一种外周血NK细胞的体外诱导扩增培养方法-CN202310558401.8在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2023-05-18 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种外周血NK细胞的体外诱导扩增培养方法，包括以下步骤：步骤一：采集外周血中分离出含NK细胞的单个核细胞(PBMC)；步骤二：将PBMC分离出NK细胞；步骤三：将分离出来的NK细胞以5*105个/毫升的浓度保存在RPMI‑1640培养基中，并存放在37℃、5％CO2的培养箱中；步骤四：将培养罐中的细胞检测划痕和细胞增殖情况，细胞密度达到1*106个/毫升时进行第一次传代；本发明的NK细胞培养周期短，可以快速让NK细胞增殖扩增，培养方法简单，无需复杂设备和技术，成本较低，通过本发明方法，可快速、高效、稳定的将NK细胞扩增到足够种类，稳定的维持在培养基中，确保细胞活力和数量的同时并筛选培养出最佳的NK细胞。
一种外周血 nk 细胞体外诱导扩增培养方法

[发明专利]一种能诱导血浆干细胞分泌细胞因子的方法-CN202310411269.8在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2023-04-18 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明涉及一种能诱导血浆干细胞分泌细胞因子的方法。本发明根据细胞培养及诱导培养需求，提供了一种完全培养基和一种诱导培养基，完全培养基中添加葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾，各组分协同作用，在干细胞培养过程中初步完成诱导培养，促进细胞因子的分泌，提高细胞培养液中细胞因子的含量；诱导培养基以玉米素、转铁蛋白、海藻酸钠、谷氨酰胺、葡萄糖为主要成分，能够有效促进干细胞的细胞因子分泌，提高了培养液中细胞因子的含量，整个过程有利于细胞因子的收集和应用，易于操作，节约成本，便于商业化的生产各种细胞因子产品。
一种诱导血浆干细胞分泌细胞因子方法

[发明专利]一种体外诱导外周血单核细胞扩增NK细胞的方法-CN202310523240.9在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2023-05-10 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种体外诱导外周血单核细胞扩增NK细胞的方法。采用的技术方案是：包括将分离得到的外周血单核细胞移入细胞培养基RPMI‑1640中，添加相应的诱导因子IL‑2、IL‑15、IL‑21以及IL‑18，放置于室温37℃和CO2的浓度为5％‑8％的环境中培养48小时，收集细胞，通过流式细胞术检测NK细胞的扩增情况。本发明的有益效果：采用IL‑2、IL‑15、IL‑21以及IL‑18作为诱导因子，能够稳定高效地扩增大量的NK细胞，同时，本方法操作简单、成本较低，且不涉及细胞工程技术等复杂操作，便于推广应用。
一种体外诱导外周血单核细胞扩增 nk 方法

[发明专利]一种细胞重编程的方法-CN202310585359.9在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2023-05-23 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及一种细胞重编程的方法。本发明在基础培养基中加入了N‑乙酰‑L‑半胱氨酸、SCF、INS、EPO、IBMX，用于诱导细胞重编程的培养中，可以显著提高体细胞的重编程效率，将人单个核细胞诱导重编程为人诱导多能干细胞的诱导率高，而选用的培养成分易得，可长期存放使用，有效降低细胞重编程培养成本，应用前景良好。
一种细胞编程方法

[发明专利]一种NK细胞的扩增方法-CN202310351592.0在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2023-04-04 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种NK细胞的扩增方法。本发明使用的CD16、曲妥珠单抗可以快速有效的使NK细胞受到信号刺激，并利用抗癌药Krestin作为细胞刺激因子，活化NK细胞，促进细胞因子的合成，有效提高NK细胞的杀伤毒性，在培养液中提供了NK细胞生长所需的多个激活及扩增信号蛋白分子，提高不同来源单个核细胞中NK细胞的扩增效率；培养过程中先在包被的培养瓶中培养，再用细胞培养袋培养，既可以保证NK细胞被充分激活，又避免了高浓度抗体对细胞诱发的凋亡，保证了扩增效率。整个培养过程易控，利用本方法可在体外大规模扩增数量多、细胞活性高、杀伤力强的NK细胞，选用的药剂易得，可有效降低细胞培养成本。
一种 nk 细胞扩增方法

[发明专利]一种从外周血提取免疫细胞的方法-CN202310378719.8在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2023-04-11 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种从外周血提取免疫细胞的方法。本发明将离心分离得到的上层血浆作为冻存液的一部分，可有效降低免疫排斥风险，分离液和冻存液中采用了海藻糖等天然糖类，对多种生物活性物质具有非特异性保护作用，银耳多糖对目的细胞也能起到保护作用，还可以为目的细胞提供营养，同时与千金藤碱还可以起到抑菌作用，协同促进对目的细胞的分离，所用药剂符合静注级原料药标准，安全性高，对细胞损伤小，操作步骤简单，易操作，整体分离提取效果好，细胞提取率高。
一种外周血提取免疫细胞方法

[发明专利]一种NK细胞的制备方法-CN202310190554.1在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2023-03-02 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种NK细胞的制备方法。采用的技术方案是：通过培养瓶包被、优化外周血采集、改进提升单个核细胞的分离、接种、扩增和细胞收获步骤，完成NK细胞的制备。本发明的有益效果：采用自体外周血或者脐血细胞中分离得到的单个核细胞，经体外操作使NK细胞活化扩增，通过激活体内特异性免疫反应达到杀灭肿瘤细胞目的，采用纯因子法培养NK细胞，操作流程简便，不含滋养细胞，有效提升NK细胞制备的纯度和活性，技术成本低，可以进行大规模临床应用。
一种 nk 细胞制备方法

[发明专利]一种自体CIK细胞高效扩增方法-CN202310190552.2在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2023-03-02 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种自体CIK细胞高效扩增方法，包括S1、制备培养瓶：向培养瓶中加入活化剂至覆盖瓶底，孵育，得活化培养瓶，所述活化剂由CD3单克隆抗体和IFN‑γ溶于PBS缓冲溶液配制而成。S2、外周血单个核细胞的分离：从患者血液中分离外周血单个核细胞，悬浮备用。S3、血小板聚集释放物的制备：分离获得血小板并用磷酸盐缓冲液重悬，获得重悬血小板；向所述重悬血小板中加入二磷酸腺苷，培养箱孵育培养2～4小时，1800～2000g离心20～25min，收获上清成分，直接作为含有血小板聚集释放物的溶液使用，或者冻干处理即得所述血小板聚集释放物。
一种 cik 细胞高效扩增方法

[发明专利]一种肿瘤抗原靶向性DC细胞的制备方法-CN202310190553.7在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2023-03-02 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明公开了一种肿瘤抗原靶向性DC细胞的制备方法，包括以下步骤：S1：用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞；S2：采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞；S3：采用无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90％以上的单个核细胞；S4：手术切除的肿瘤标本在无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净，并用无菌生理盐水洗3次，并将肿瘤组织剪碎加入RPMI1640培养基内进行充分研磨，研磨后用无菌网过滤后收集单细胞悬液，本肿瘤抗原靶向性DC细胞的制备方法，采用外周血单个核细胞制备肿瘤抗原靶向性DC细胞，外周血单核细胞最容易获取、数量也最多，因此能使得肿瘤抗原靶向性DC细胞制备效率高，数量多。
一种肿瘤抗原靶向 dc 细胞制备方法

[发明专利]一种细胞重编程装置-CN202211707118.9在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞重编程装置，采用的技术方案是，包括培养箱，所述培养箱为矩形壳体，其前侧壁上半部开设倾斜面，所述倾斜面的左侧开设触控显示屏，所述倾斜面的右侧开设设置面板，所述培养箱的左右侧壁的中间开孔安装橡胶手套，所述培养箱的底部的上表面的中间安装加热台，所述加热台上放置两个培养皿，所述培养箱的上表面左侧安装电子显微镜，所述培养箱的后侧壁左侧开孔连接空气发生器的进气管，所述培养箱的后侧壁右侧开孔安装排气装置；本发明有益效果：通过设计该培养箱，为体细胞的重编程提供一个适合细胞发育的清洁环境，规避其他外界因素的干扰，确保实验过程的科学性和准确性，同时，无须实验人员长期值守，减轻其劳动强度。
一种细胞编程装置

[发明专利]一种NK细胞的诱导培养方法-CN202310001861.0在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2023-01-03 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种NK细胞的诱导培养方法，通过利用Percoll原液与等量双离子强度的磷酸缓冲液混合，进行离心提取获取外周血单个核细胞，并使用IL‑2和IL‑3诱导激活单个核细胞中的少量NK细胞快速增殖，当IL‑2和IL‑3的浓度分别为1100‑1500u/ml和300‑1000u/ml时，其诱导增殖较为高效，确定了最适培养时间是14天，这是通过比较不同培养时间的NK细胞肿瘤杀伤率确定的。
一种 nk 细胞诱导培养方法

[发明专利]一种细胞重编程诱导用组合物-CN202211685790.2在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞重编程诱导用组合物，其主要成分为：单个核细胞，基础培养基，L‑谷氨酰胺，聚肌胞苷酸，重组人粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子，重组人白细胞介素，胰岛素和干扰素，该细胞重编程诱导用组合物由单个核细胞、L‑谷氨酰胺、聚肌胞苷酸、重组人粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素、胰岛素和干扰素β以及RPMI‑1640、无血清培养液和前列腺素E经配比培养的组合物，可增强细胞的抗原递呈功能，增强DC的存活，提高DC的产量、成熟度、迁移能力和免疫激活能力，促进细胞重编程诱导，获得较高功能性的DC，可作为DC激活成熟和驱动初始T细胞启动和效应分化的组合物。
一种细胞编程诱导组合

[发明专利]一种外周血单个核细胞的提取收集方法-CN202211303889.1在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2022-10-24 - 公布日： 2022-12-27 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种外周血单个核细胞的提取收集方法。采用的技术方案是：采用Ficoll离心法提取外周血单个核细胞，加入D‑Hanks溶液，提高分层效果，加入不同的抗凝剂，验证外周血单个核细胞的提取效果，加入微小核糖核酸，提高单个核细胞的增值能力，提高其生物活性。本发明的有益效果：通过采用肝素和EDTA的及混合液作为抗凝剂，加入甘草制备的微小核糖核酸，能够进一步提高单个核细胞的增值能力，提高单个核细胞分离提取的活性。
一种外周血单个细胞提取收集方法

[发明专利]一种树突状细胞的制备方法-CN202211302830.0在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2022-10-24 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明公开了一种树突状细胞的制备方法，通过常规方法将单个核细胞进行分离并培养DC细胞，加入重组人粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4进行培养，得到具有较强抗原摄取和加工能力，但是抗原递呈能力较弱的DC细胞，再加入重组人肿瘤坏死因子‑α，白细胞介素‑1β和白细胞介素‑6，诱导DC细胞成熟，从而获得完全成熟的DC细胞，此时DC的抗原摄取和加工能力减弱，但是抗原递呈能力增强，通过重组人肿瘤坏死因子‑α，白细胞介素‑1β和白细胞介素‑6与前列腺素E2组合，可进一步提高DC的产量、成熟度、迁移能力和免疫激活能力，使诱导成熟的DC因表面趋化因子受体的高表达，可以激活T细胞，引起免疫反应。
一种树突细胞制备方法

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