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[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α-淀粉酶的方法-CN202310120217.5有效
发明人：肖亚中;姚动邦;房伟;韩旭东;张学成;方泽民 -专利权人：安徽大学绿色产业创新研究院
申请日： 2023-02-03 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α‑淀粉酶的方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以pBHVY为载体骨架，以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因，以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主，改造了启动子，筛选了信号肽，优化了RBS序列，并对获得的重组菌进行了3‑L罐发酵补料工艺优化。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达生淀粉α‑淀粉酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵48h，发酵上清液中生淀粉α‑淀粉酶的酶活为4824.2U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外生淀粉α‑淀粉酶的酶活可高达49082U/mL，是目前文献报道的最高水平。
一种利用枯草芽孢杆菌高效表达淀粉淀粉酶方法

[发明专利]一种灰盖鬼伞来源的蛋白酶基因的重组表达及其重组酶降解大豆渣的应用-CN202310729760.5在审
发明人：方泽民;冉杰;张学成;姚动邦;刘娟娟 -专利权人：安徽大学
申请日： 2023-06-16 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开了一种灰盖鬼伞来源的蛋白酶基因的重组表达及其重组酶降解大豆渣的应用，属于分子生物学和基因工程领域。本发明实现了灰盖鬼伞来源的蛋白酶基因mpr的同源重组表达。获得的灰盖鬼伞重组菌株经摇瓶发酵后的胞外蛋白酶酶活可达41000U/L左右。纯化后的蛋白酶的比酶活为204.38U/mg。酶学性质分析结果表明，该蛋白酶的最适温度为50℃，且在30‑50℃范围内保持1h后该蛋白酶能保持70％以上的酶活；该蛋白酶的最适pH为8.0，在pH范围6.5‑9.0时，该蛋白酶的酶活效率能保持在70％以上，同时，该蛋白酶可有效将大豆渣蛋白水解成小分子肽。
一种灰盖鬼伞来源蛋白酶基因重组表达及其降解豆渣应用

[发明专利]一种高效表达生淀粉α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组菌及其应用-CN202210914414.X在审
发明人：肖亚中;李鹤;姚动邦;方泽民;房伟 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-08-01 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达生淀粉α‑淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组菌及其应用。本发明枯草芽孢杆菌重组菌以pBHSS142为表达载体、以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因、以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WB600为表达宿主，在目的基因的上游插入了信号肽基因，改造了启动子、5'非翻译区序列和近端编码序列。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达α‑淀粉酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵48h，可将发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至2974U/mL。
一种高效表达淀粉淀粉酶枯草芽孢杆菌重组及其应用

[发明专利]一种在枯草芽孢杆菌中表达α-淀粉酶的方法-CN202011601201.9有效
发明人：吴敬;姚动邦;张康;宿玲恰 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2022-09-06 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中表达α‑淀粉酶的方法，属于基因工程以及生物工程技术领域。本发明通过敲除枯草芽孢杆菌WS9基因组上的hrcA基因，获得了枯草芽孢杆菌基因工程WHS9；通过优化Sec分泌系统元件，发现共表达编码Sec分泌系统中膜转运通道的主要成分SecYEG的基因最有利于α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的重组表达；通过筛选到的信号肽平衡了α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的整个分泌过程，最终获得的枯草芽孢杆菌重组菌WHS9GSAB经摇瓶培养后胞外α‑淀粉酶活性为2835.1U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外α‑淀粉酶活性可高达35779.5U/mL。
一种枯草芽孢杆菌表达淀粉酶方法

[发明专利]一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌-CN201810777468.X有效
发明人：吴敬;宿玲恰;姚动邦 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-07-16 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效表达α‑淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的枯草芽孢杆菌工程菌以pHY300PLK为表达载体、以来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的高温α‑淀粉酶基因为目的基因、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主，并在目的基因的上游插入了信号肽基因。利用本发明的枯草芽孢杆菌工程菌可高效表达α‑淀粉酶，将其作为生产菌株，摇瓶发酵48h，可将发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至732.1U/mL。
一种高效表达淀粉酶枯草芽孢杆菌工程

[发明专利]一种酶活提高的α-淀粉酶突变体及其应用-CN201811002140.7有效
发明人：吴敬;宿玲恰;姚动邦 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-08-30 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12N9/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶活提高的α‑淀粉酶突变体及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸或将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸或同时将将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸以及第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸得到的；将以编码本发明的突变体的基因为目的基因、以pHY300PLK为表达载体、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主构建得到的重组枯草芽孢杆菌工程菌发酵48h，可使得发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至474.7U/mL。
一种提高淀粉酶突变体及其应用

[发明专利]一种利用重组嗜乙酸棒杆菌发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法-CN201610035787.4在审
发明人：张震宇;王晓姣;姚动邦;魏照辉;黄建华 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-01-19 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12P13/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用重组嗜乙酸棒杆菌发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法。该重组嗜乙酸棒杆菌携带的重组质粒具有催化脯氨酸生成反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(P4H)。在重组嗜乙酸棒杆菌细胞内，脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸以及亚铁离子存在的情况下，可以将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸。本发明还公开了所述在嗜乙酸棒杆菌反式-4-羟基-L-脯氨酸生产中的应用。
一种利用重组乙酸杆菌发酵生产反式羟基脯氨酸方法

[发明专利]一种利用基因组改造的重组大肠杆菌发酵生产L-脯氨酸的方法-CN201610034446.5在审
发明人：张震宇;姚动邦;王晓姣;魏照辉;黄建华 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-01-19 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用基因组改造的重组大肠杆菌发酵生产L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌基因改造菌携带具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)，基因组中proB500被替换成proB2500。其中具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)是从本实验室保存的含有该基因的重组质粒上酶切获得，proB2500是依proB2A为模板，设计合适的引物，通过PCR获得的。本发明还公开了所述大肠杆菌在L-脯氨酸生产中的应用。
一种利用基因组改造重组大肠杆菌发酵生产脯氨酸方法

[发明专利]一种利用重组大肠杆菌无外源L-脯氨酸发酵生产反式-4-羟脯氨酸的方法-CN201610034465.8在审
发明人：张震宇;姚动邦;王晓姣;黄建华;魏照辉 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-01-19 - 公布日： 2016-05-11 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用重组大肠杆菌直接从葡萄糖发酵生产反式-4-羟脯氨酸的方法，该方法是先将突变后的γ-谷氨酸激酶基因(proB₂A)与连有色氨酸串联启动子的反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(hyp)重组到合适的载体上，构建proB₂A与hyp的共表达体系，然后将此共表达体系导入到大肠杆菌中，得到的重组菌能够实现在无外源L-脯氨酸的条件下，能够高效的利用葡萄糖直接发酵生产反式-4-羟脯氨酸，从而降低了发酵生产反式-4-羟脯氨酸的成本，提高了经济效益。本发明还公开了所述大肠杆菌在羟脯氨酸生产中的应用。
一种利用重组大肠杆菌无外源脯氨酸发酵生产反式羟脯氨酸方法

[发明专利]一种发酵液中顺式-3-羟基L-脯氨酸的快速检测方法-CN201610035855.7在审
发明人：张震宇;黄建华;王晓姣;姚动邦;魏照辉 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-01-19 - 公布日： 2016-05-11 - 主分类号： G01N21/33 文献下载
摘要：本发明公开一种发酵液中顺式-3-羟基L-脯氨酸的快速检测方法，旨在提供一种使用方便，快速简便，灵敏度高的顺式-3-羟基L-脯氨酸快速检测方法。该方法相比常用的高效液相色谱法和氯胺T法具有无需贵重仪器、操作简单、反应时间短、所需样品少、灵敏度较高等优点。大幅度的提高了工作效率，具有广泛的应用和推广价值。
一种发酵顺式羟基脯氨酸快速检测方法

[发明专利]一种通过敲除其他代谢途径进而提高反式-4-羟脯氨酸产量的生物合成方法-CN201610035648.1在审
发明人：张震宇;王晓姣;姚动邦;黄建华;魏照辉 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-01-19 - 公布日： 2016-05-04 - 主分类号： C12P13/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种有效提高羟脯氨酸产量的生物合成方法。其中，生物合成法生产羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内生物体在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下利用脯氨酸羟化酶，将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高羟脯氨酸产量的方法为：切断生物细胞内与L-脯氨酸竞争前体底物谷氨酸的其他代谢途径。其中，其他代谢途径是指，精氨酸代谢途径。通过使用这种方法，反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到921mg/L。
一种通过其他代谢途径进而提高反式羟脯氨酸产量生物合成方法

[发明专利]一种在生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统中有效提高脯氨酸转化率的方法-CN201610032734.7在审
发明人：张震宇;黄建华;王晓姣;姚动邦;魏照辉 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-01-19 - 公布日： 2016-05-04 - 主分类号： C12N15/71 文献下载
摘要：公开了一种在生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统中有效提高脯氨酸转化率的方法。其中，生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内利用脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下，将游离的L-脯氨酸转化为顺式-3-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高脯氨酸转化率的方法为：打断生物细胞内脯氨酸的降解途径。通过使用这种方法，顺式-3-羟基-L-脯氨酸的转化率达到了100％。
一种生物成法生产顺式羟基脯氨酸系统有效提高转化方法

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