本发明提供了一种用于精准编辑绵羊OCT4基因的sgRNA、扩增用引物和应用,属于基因工程和细胞工程技术领域。一种用于精准编辑绵羊OCT4基因的sgRNA,其特征在于,所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述sgRNA在敲除绵羊OCT4基因中的应用。本发明设计的OCT4‑sgRNA靶向OCT4基因第二外显子区域进行识别和删除。实验表明,将所述sgRNA通过基因编辑技术敲除绵羊OCT4基因,经过测序统计,基因编辑效率达到56.7%,与其他针对绵羊OCT4基因的sgRNA的基因编辑效率相比,具有显著优势,为后续研究绵羊OCT4基因在早期胚胎发育中的调控作用奠定基础。