本发明提出了一种检测胰岛素或其类似物的生物学活性的方法及试剂盒。所述检测方法包括一种分离的核酸分子,所述核酸分子包括:第一核酸片段,所述第一核酸片段编码胰岛素受体B;第二核酸片段,所述第二核酸片段编码STAT5b响应元件;第三核酸片段,所述第三核酸片段编码报告基因;所述STAT5b响应元件包含如SEQ ID NO:1~3任一项所示的核酸序列;所述第一核酸片段、第二核酸片段与所述第二核酸片段与第三核酸片段相连或不相连。本发明所述检测方法具有检测窗口值更大,准确度更高,精密度更佳,变异更小,操作更简便,检测成本更低等优点。