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[发明专利]一种基于无缝克隆技术的全新质粒定点突变方法-CN202211714275.2在审
发明人：武志强 -专利权人： 北京海创科业生物科技有限责任公司
申请日： 2022-12-29 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于无缝克隆技术的全新质粒定点突变方法、试剂盒及应用，属于基因工程技术领域。基于无缝克隆原理优化方法，目标突变点设计在引物5′端，可插入50bp以内的连续位点或间隔位点突变操作，50bp以内的插入突变相较于其他突变方法进一步提升；可进行单点或多点突变(最多5个间隔位点)的替换点突变；可以进行无长度序列限制的删除点突变操作。该方法解决了质粒模板必须被甲基化的限制问题，通过使用极低的模板使用量1ng和极高的PCR扩增效率，使突变后的产物以极高的比例压制未被突变的模板质粒，此方法效率极高。使用该方法定点突变质粒不需要购买昂贵的商业化试剂盒，经济成本很低，适用范围更广。
一种基于无缝克隆技术全新质粒定点突变方法

[发明专利]一种pMini-CopGFP质粒载体的构建方法及其应用-CN202210615244.5在审
发明人：武志强;邱林 -专利权人： 北京海创科业生物科技有限责任公司
申请日： 2022-05-31 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种pMini‑CopGFP质粒载体的构建方法及其应用，属于生物技术领域。该专门应运于mRNA体外剪接技术的质粒载体pMini‑CopGFP，此质粒具有单独的荧光蛋白CopGFP表达元件，不受验证基因影响，可以通过转染细胞后观察细胞的绿色发光情况确定质粒转染效率。使用的人源化的hPGK启动子，额外添加的独立的内含子，使用一对通用的引物MiniRT‑F和MiniRT‑R可以验证任何使用此载体的任何基因变异位点，此引物结合在质粒载体部分，不受内源性基因表达影响，且转录条件更加符合人体，结果更加真实。
一种 pmini copgfp 质粒载体构建方法及其应用