本发明涉及流感病毒检测领域,尤其涉及一种流感病毒N1、N2亚型双重实时荧光RT-PCR检测试剂盒,所述试剂盒包括:特异性扩增流感病毒N1基因序列的引物,其碱基序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示;用于检测流感病毒N1基因的Taqman探针,其碱基序列如SEQ ID NO:3所示;特异性扩增流感病毒N2基因序列的引物,其碱基序列如SEQ ID NO:4和SEQ IDNO:5所示;用于检测流感病毒N2基因的Taqman探针,其碱基序列如SEQ IDNO:6所示;上述所有Taqman探针序列可由其碱基互补序列替换。采用本发明所述试剂盒对流感病毒N1、N2亚型进行检测,具有快速简单、低成本、结果稳定等优点。