本发明公开了一种L‑氨基酸脱氢酶突变体及其编码基因、基因工程菌及其在制备L‑草铵膦中的应用,该L‑氨基酸脱氢酶突变体包括:以SEQ ID NO.1所示野生型的L‑氨基酸脱氢酶为模板,第354位的V替换为G所得突变体;第152位的A替换为G所得突变体;第152位和第354位联合突变形成的突变体;第156位的N突变成A与第152位、第354位联合突变形成的突变体。本发明通过分子改造,获得了一类在催化2‑羰基‑4‑(羟甲基膦酰基)丁酸制备L‑草铵膦工艺中具有高酶活的L‑氨基酸脱氢酶突变体,使用全细胞对500mM底物PPO进行转化时,底物转化率在4小时内可以达到99%以上,具有很强的工业应用前景。