本发明属于农业生物技术领域,具体涉及一种桔小实蝇dsRNA细菌表达菌液的制备及其使用方法,选取桔小实蝇Flightin基因的部分序列SEQ ID NO.1,通过引物设计、flightin基因及对照egfp基因片段的克隆、构建桔小实蝇RNAi干扰表达载体、重组质粒转化大肠杆菌HT115以及dsRNA在大肠杆菌HT115中的表达,获得桔小实蝇dsRNA细菌表达菌液。本发明采用重组质粒可以在大肠杆菌HT115中表达大量所需的外源目的dsRNA的方法,降低了实验成本,持续饲喂菌液后对桔小实蝇的飞行能力有抑制作用,具有广阔的应用前景。