[发明专利]用于检测血清中抗体的指示条

说明书

本发明涉及用于检测病人血清中抗体的指示条，它具有一个或多个固定有一种或几种疾病抗原的区域。当加入病人血清时，各抗原结合到相应于该疾病的抗体上并使该抗体在随后反应中作为染色斑而可见。

这种用于试验的指示条也称为酶免疫测定，用于DE3346795Al中已知的抗体并形成权利要求1的前序部分。其中描述的试验用于疾病的血清学检测，如由病毒，细菌或类似病原体引起的感染。该试验利用了这样的事实：即，当存在疾病时，身体在其血清中形成相应于该病原体抗原的抗体(它们结合到抗原上并使其无害)。可间接推断如果可在该血清中成功地检测到该疾病特异性抗体，那么必然目前或者以前感染了该疾病。由于其操作机制，该试验属于所谓的间接测量方法，因为该试验不直接检测该病原体(抗原)，而是检测身体与该病原体反应产生的特异性抗体。

为了生产这种已知的测试条，应用抗原，即引起各种疾病的病原体的已知蛋白质并将其固定到几个测试区的固相上，特别是硝酸纤维素或聚酰胺薄片上。随后，使未被抗原占据的薄片上的吸收位置饱和。经过将病人血清滴到试验条上进行试验。在病人血清中存在的病原体特异性的抗体与沉积的病原体特异性抗原形成特异性的带，即所谓的抗原抗体反应，Ag-Ab-或者免疫反应。然后，在随后的反应中使抗原结合的抗体肉眼可见，例如经过用特异性的酶偶联物处理并随后加入偶联物中酶的底物和一种染色前体。在薄片上形成清楚可见并较好地附着在薄片上的有色斑点(称为“印迹”，在免疫反应后称为“免疫印迹”)。在每步上述处理步骤后添加一步洗涤步骤去掉多余的试剂。最后以肉眼评价薄片上的染色斑点。含有疾病前或疾病发作中的病原体特异性抗原的区域被染色，而其它区域未被染色。

上述方法和测试条可用于血清的定性检测，但不能定量某些病原体特异性的抗体(因此也不能定量疾病)。人们需要不仅知道现在存在或者过去存在的疾病，而且需要定量存在的抗体。这种知识可有助于了解疾病的严重性和急性程度。

因此本发明的目的是提供一种允许定量血液中存在的抗体的指示条。

为了达到该目的，根据本发明的指示条其特征在于提供固定有不同浓度的人对照抗体的添加区域。这些区域在免疫反应之后的随后的常规(酶)反应中根据存在的抗体数目被染色。经过比较添加区域与抗原区域的颜色(深度)，不仅可测定疾病的类型，而且可定量血清中的抗体，即该疾病的严重性和急性程度。

本发明利用的惊人发现是，染色反应不仅标记了待测液体固定于固相上的含有病人病原体特异性抗体的区域，而且在固相上使用了对照抗体。酶-底物染色反应使病人抗体和对照抗体的染色深度均增加。由于将不同浓度的对照抗体加入到试验条的固相上且酶-底物染色反应形成作为参照抗体各浓度之特征的染色斑点，因而产生了颜色比较标准且由此产生了固定于固相上的抗体浓度的比较标准。经过比较标准区的染色强度与试验区的染色强度可直接测定抗体的量。如果在两个区域存在相同量的抗体则颜色深度相同。如果病人抗体的颜色深度位于沉积的对照抗体浓度的两个染色深度之间，那么病人抗体的量相应于两个浓度之间的一个值。因此，可以监测免疫性，即对病原体的获得性免疫，并测定潜伏疾病的状态或严重性，如传染病，自体免疫疾病，例如，风湿症，过敏反应，肿瘤等。

本发明还使得更好地追踪疾病的动态进展成为可能，因为经过测定按本发明提供的抗体浓度在培养一定时间后可定量测定针对特定病原体的药物效力和/或药物剂量。本发明还提供了定量检测体液中抗体的测量仪器，其中该仪器不仅能在任意地点和任意时间直接读数和通用，而且可廉价地制造。

为实施本发明，优选将特异性抗原(在试验条设计成用于检测一种疾病的情况下)或多种抗原(在试验条设计成用于检测几种疾病的情况下)加到固相上导致抗体结合到固相上。可将几种不同的抗原加到固相上以同时试验几种疾病，例如，不同的传染病。

根据本发明具有优势的实施方案，可加入具有相同亚型特定类型的对照抗体，例如，IgG,IgA,IgM等。以这种方式，该试验可定量检测具体疾病。换句话说，应用某种特定亚型的对照抗体提供检测该疾病的所需确定性标准。经过将标准与不同亚型特异性对照抗体进行比较，也可测定体液中存在的亚型特异性抗体类型。

根据本发明的另一实施方案，经过用诸如亚型特异性免疫球蛋白G型，A型或M型(IgG,IgA,IgM)等的酶偶联物处理固相可检测抗体和对照抗体。以这种方式，按所用的酶偶联物仅标记具有相同亚型特异性类型的那些抗体和对照抗体。经过使用相同亚型特异性类型的对照抗体和酶偶联物可测定待测体液中存在的抗体类型。