[发明专利]控制根系病害的生物控制剂

权利要求书

1．一种荧光假单胞菌菌株的生物学上纯的培养物，它含有编码2，4-二乙酰间苯三酚产生的生物合成基因座。

2．如权利要求1的生物学上纯的培养物，其中，所述荧光假单胞菌具有稳定导入其基因组中的吩嗪-1-羧酸产生的生物合成基因座。

3．如权利要求1或2的生物学上纯的培养物，其中，所述荧光假单胞菌在用引物M13通过随机扩增多态DNA(RAPD)分析鉴定使具有下列带：600±50bp；700±50bp；800±50bp；900±50bp。

4．如权利要求3的生物学上纯的培养物，其特征还在于具有330±20bp和1100±60bp的带。

5．如权利要求1-4中一项的生物学上纯的培养物，其中所述菌株的特征还在于具有在大田生长的小型谷类作物或草坪草上抑制由禾顶囊壳菌(Gg)真菌导致的病害的能力，所述能力优选相当于当所述小型谷类作物生长在处于全枯病衰减状态的土壤中时所获得的生物控制水平。

6．如权利要求1或2的生物学上纯的培养物，其中，所述菌株的特征还在于具有抑制植物上由丝核菌属真菌导致的根系病害的能力。

7．如权利要求1或2的生物学上纯的培养物，其中，所述的菌株的特征还在于具有在植物上抑制由禾顶囊壳菌(Gg)或腐霉菌属真菌导致的根系病害的能力。

8．如权利要求1-4中一项所述的生物学上纯的培养物，其中，所述菌株的特征还在于具有以至少大约10⁵菌落形成单位(CFU)／克根(包括相关的根际土壤)寄居根系的能力，该能力可持续至少5个连续的生长周期。

9．如权利要求8的生物学上纯的培养物，其中，所述菌株的根系寄居能力不受土壤类型影响。

10．如权利要求1的生物学上纯的培养物，其中，所述荧光假单胞菌菌株具有荧光假单胞菌NRRL B-21806、NRRL B-21807、NRRL B-21808、NRRL B-21905、NRRL B-21906、NRRL B-21907、或NRRL B-21908的识别特征。

11．如权利要求1的生物学上纯的培养物，它还包括一种农业载体。

12．一种用于筛选细菌以便选择具有权利要求1或3的特征的菌株的方法，该方法包括：

(1)在天然全枯病抑制土壤上用连续的生长周期栽培小型谷类作物或草坪草，以便富集Phl-生产荧光假单胞菌，包括以下步骤：(a)在温室中在处于全枯病衰减状态的土壤(TAD土壤)上生长小型谷类作物或生产草坪草的种子至少3周，生产条件为能有效支持所述小型作物或草坪草生长以便获得幼苗；(b)收集所述土壤和生长在该土壤上的小型谷类作物或草坪草幼苗的根系，并将其混合在一起；(c)一共重复步骤(a)至(b)至少4个连续的周期，其中，将步骤(b)的混合物用于在随后的周期中种植种子；

(2)从在步骤(1)中连续栽培的小型谷类作物或草坪草的根系和相关的根际土壤中分离潜在的抑制性荧光假单胞菌菌株，让所述菌株在使假单胞菌有效生长的条件下；在假单胞菌属筛选培养基上生长1次，并选择生长在该培养基上的假单胞菌；

(3)对步骤(2)中分离的菌株进行筛选，通过让所述菌株的菌落与2，4-二乙酰间苯三酚特异性探针杂交并筛选能与该探针杂交的菌株，选择含有编码2，4-二乙酰间苯三酚(Phl)产生的生物合成基因座的菌株；

(4)用引物M13进行随机扩增多态DNA分析，并选择具有下列带的菌株作为Gg抑制菌株：600±50bp；700±50bp；800±50bp；900±50bp。

13．如权利要求12的方法，在步骤(3)和(4)之间还包括一个步骤，该步骤包括用扩增具有Phl生物合成基因座的序列的引物证实Phl生产菌株，并选择能产生阳性PCR反应的菌株。

14．一种用于在易感由丝核菌属、腐霉菌属、或禾顶囊壳菌真菌(Gg)导致的根系病害的植物上控制所述根系病害的方法，该方法包括在有有效生物控制量的权利要求1-4中一项的荧光假单胞菌菌株的培养物的条件下生长所述植物。

15．如权利要求14的方法，其中，所述植物选择下列一组：小型作物、草坪草或粮食、纤维或观赏植物。