[发明专利]细胞骨架样基因的编码蛋白特异性抗体无效
| 申请号： | 98111422.9 | 申请日： | 1998-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN1065876C | 公开（公告）日： | 2001-05-16 |
| 发明（设计）人： | 周建伟 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18 |
| 代理公司： | 南京大学专利事务所 | 代理人： | 胡锡瑜 |
| 地址： | 210029 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞骨架 基因 编码 蛋白 特异性 抗体 | ||
本发明属于人类基因组技术领域。
本发明所述细胞骨架样基因(JWA)是发明人在美国加州大学戴维斯(UCDavis)访问研究期间(1996．3～1998．3)用DD-PCR，噬菌体筛选法，RACE-PCR等方法从人气管支气管上皮细胞构建的cDNA文库中克隆的与细胞骨架有关的全新基因。该基因全长cDNA序列为2107bp，其开放读框序列为564bp，共编码188个氨基酸。进一步研究显示JWA基因开放读框序列中含有三个膜转运区，每个区含有23个氨基酸，在三个膜转运区的两端有蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点。Northern杂交分析显示该基因有两个大小不同的mRNA转录物，经反向转录，3′-RACE-PCR，Southern杂交分析和Rnase Protection Assay等研究已确定两个转录物的确切终止位置。用携带JWA基因开放读框序列的表达载体(PCMV-2-Flag-JWA)转染S-6和HBE细胞后的免疫荧光染色结果显示JWA基因编码的蛋白酷似细胞骨架微管。该蛋白明显地受去聚合剂colchicine和nocodazole的影响但不受冷处理的影响。另外，该基因在几种肿瘤细胞中的表达明显地受去甲基化药物5-azacytidin的影响。
由于JWA基因序列在GenBank数据库中尚无同源性基因，故发明人对于JWA基因的结构和功能研究结果全部是开创性的。美国国家生物技术情报中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)己于最近正式接受JWA基因作为GenBank的新成员。该基因编号为“BankIt 200994，Accession Number：AF070523”。GAATTCGGCACGAGCCGAGACGGAGCCGCTGTCAACTCTCCAACTCAGCTCAGCTGATCGGTTGCCGCCGCCGCCGCCGCCAGATTCTGGAGGCGAAGAACGCAAAGCTGAGAACATGGACGTTAATATCGCCCCACTCCGCGCCTGGGACGATTTCTTCCCGGGTTCCGATCGCTTTGCCCGGCCGGACTTCAGGGACATTTCCAAATGGAACAACCGCGTAGTGAGCAACCTGCTCTATTACCAGACCAACTACCTGGTGGTGGCTGCCATGATGATTTCCATTGTGGGGTTTCTGAGTCCCTTCAACATGATCCTGGGAGGAATCGTGGTGGTGCTGGTGTTCACAGGGTTTGTGTGGGCAGCCCACAATAAAGACGTCCTTCGCCGGATGAAGAAGCGCTACCCCACGACGTTCGTTATGGTGGTCATGTTGGCGAGCTATTTCCTTATCTCCATGTTTGGAGGAGTCATGGTCTTTGTGTTTGGCATTACTTTTCCTTTGCTGTTGATGTTTATCCATGCATCGTTGAGACTTCGGAACCTCAAGAACAAACTGGAGAATAAAATGGAAGGAATAGGTTTGAAGAGGACACCGATGGGCATTGTCCTGGATGCCCTAGAACAGCAGGAAGAAGGCATCAACAGACTCACTGACTATATCAGCAAAGTGAAGGAATAAACATAACTTACCTGAGCTAGGGTTGCAGCAGAAATTGAGTTGCAGCTTGCCCTTGTCCAGACCTATGTTCTGCTTGCGTTTTTGAAACAGGAGGTGCACGTACCACCCAATTATCTATGGCAGCATGCATGTATAGGCCGAACTATTATCAGCTCTGATGTTTCAGAGAGAAGACCTCAGAAACCGAAAGAAAACCACCACCCTCCTATTGTGTCTGAAGTTTCACGTGTGTTTATGAAATCTAATGGGAAATGGATCACACGATTTCTTTAAGGGAATTAAAAAAAATAAAAGAATTACGGCTTTTACAGCAACAATACGATTATCTTATAGGAAAAAAAAAAATCATTGTAAAGTATCAAGACAATACGAGTAAATGAAAAGGCTGTTAAAGTAGATGACATCATGTGTTAGCCTGTTCCTAAATCCCTAGAATTGTAATGTGTGGGATATAAATTAGTTTTTATTATTCTCTTAAAAATCAAAGATGATCTCTATCACTTTGCCACCTGTTTGATGTGCAGTGGAAACTGGTTAAGCCAGTTGTTCATACTTCCTTTACAAATATAAAGATAGCTGTTTAGGATATTTTGTTACATTTTTGTAAATTTTTGAAATGCTAGTAATGTGTTTTCACCAGCAAGTATTTGTTGCAAACTTAATGTCATTTTCCTTAAGATGGTTACAGCTATGTAACCTGTATTATTCTGGACGGACTTATTAAAATACAAACAGACAAAAAATAAAACAAAACTTGAGTTCTATTTACCTTGCACATTTTTTGTTGTTACAGTGAAAAAAATGGTCCAAGAAAATGTTTGCCATTTTTGCATTGTTTCGTTTTTAACTGGAACATTTAGAAAGAAGGAAATGAATGTGCATTTTATTAATTCCTTAGGGGCACAAGGAGGACAATAATAGCTGATCTTTTGAAATTTGAAAAACGTCTTTAGATGACCAAGCAAAAAGACTTTAAAAAATGGTAATGAAAATGGAATGCAGCTACTGCAGCTAATAAAAAATTTTAGATAGCAATTGTTACAACCATATGCCTTTATAGCTAGACATTAGAATTATGATAGCATGAGTTTATACATTCTATTATTTTTCCTCCCTTTCTCATGTTTTTATAAATAGGTAATAAAAAATGTTTTGCCTGCCAATTGAATGATTTCGTAGCTGAAGTAGAAACATTTAGGTTTCTGTAGCATTAAATTGTGAAGACAACTGGAGTGGTACTTACTGAAGAAACTCTCTGTATGTCCTAGAATAAGAAGCAATGATGTGCTGCTTCTGATTTTTCTTGCATTTTAAATTCTCAGCCAACCTACAGCCATGATCTTTAGCACAGTGATATCACCATGACTTCACAGACATGGTCTAGAATCTGTACCCTTACCCACATATGAAGAATAAAATTGATTAAAGGTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACTCGAGJWA基因cDNA序列MDVNIAPLRAWDDFFPGSDRFARPDFRDISKWNNRVVSNLLYYQTNYLVV 50AAMMISIV(1)GFLSPFNMILGGIVVVLVFTGFVWAAHN(2)KDVLRRMKKRYPTT 100FVMVVMLASYFLISMFGGVMVFVFGITFPL(3)LLMFIHASLRLRNLKNKLEN 150KMEGIGLKRTPMGIVLDALEQQEEGINRLTDYISKVKE 188
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