[发明专利]胸腺蛋白口服液

说明书

本发明涉明的是一种用以治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡的药物——胸腺蛋白口服液；本发明也是CN92105643.5的后续专利。

在CN92105643.5中，我们已提出了大约在七十年代初期，Goldstein等人从小牛胸腺中分离出一组能调节免疫系统的多肽，生化分析表明，上述胸腺肽是具有活性的单一肽类，其分子量均小于15000道尔顿。七十年中期，Hooper等人在小牛胸腺肽的制备中第一次采用超滤技术截留分子量小于15000道尔顿的胸腺肽组份；在以后的几年中，许多学者对小牛胸腺肽的生物活性作大量的工作，并从胸腺肽组织中分离的具有免疫活性成份的分子量如：77年Go ldstein提出的分子量为3108道尔顿的制品a；79年Ahmed提出的分子量为2500道尔顿的制品a7：以及81年Low提出的分子量为4982道尔顿的制品a。

92年，我们提出了从乳猪胸腺中提取出一组中分子量水溶性胸腺蛋白，并对其进行促细胞增殖活性的研究。

对在先专利所述的中分子量水溶性胸腺蛋白的各种物化参数的进一步研究所得出的本发明所述的胸腺蛋白口服液为分子量5万以下的水溶性胸部腺蛋白，其主要活性为3～5万的中分子量水溶性胸腺蛋白，本发明所述的胸腺蛋白口服液对胃溃疡、十二指肠球部溃疡的冶疗有非常明显的效果。

本发明的主要目的是提供一种用于治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡的药物——胸腺蛋白口服液，它是由主要活性为3～5万的中分子量水溶性胸腺蛋白，加上具有部分活性的3万以下的小分子量水溶性胸腺蛋白组成。

本发明所述的胸腺蛋白的制备方法简述如下：选用40～60天健康乳猪(或其它幼龄哺乳动物)的胸腺，拔除胸腺上的脂肪组织，将胸腺低温高速捣碎，将捣碎后的匀浆在80-90℃之间保持10-30分钟，然后，离心分离去沉淀，留上清液，进行透析，截留分子量为5万以下的水溶性胸腺蛋白，再经过除菌、分装、冻干等常规处理，就得到了胸腺蛋白口服液。

图1是不同浓度的胸腺蛋白口服液对内皮细胞(EC)的增殖状况。

图2是不同浓度的胸腺蛋白口服液对小鼠3T3成纤维细胞(FC)的增殖状况。

图3是胸腺蛋白口服液、成猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)对内皮细胞的增殖效应。

图4是胸腺蛋白口服液、成猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)对成纤维细胞的增殖效应。

图3、图4中1是胸腺蛋白口服液、2是成猪胸腺蛋白(TP)、3是胸腺肽注射液(TF)、4是肝细胞生长素注射液(HGF)；方框中空白是试样，阴影为对照。

图5是本发明所述的胸腺蛋白口服液单独或和其它药物组合以及本发明所述的胸腺蛋白口服液在不同剂量互相或和盐水对照下愈合率的比较；

图6、7是胸腺蛋白口服液在不同条件下的高效液相色谱图；

图8是胸腺蛋白的紫外扫描图谱，由中山医科大学分析测试中心测试；

将上述方法制备的胸腺蛋白口服液进行各项试验，具体内容如下。

样品包括：胸腺蛋白口服液，胸腺肽注射液(TF)，由广东省生物制品研究所提供；促肝细胞生长素注射液，由广东省阳江制药厂提供。内皮细胞(EC)的制备与在先专利相同。

传代培养时，用D-Hanks′液轻洗细胞单层2～3遍。用0.06％胰蛋白酶在室温下消化1-2分钟，弃消化液，加入内皮细胞培养液，用吸管吹打20-30次，制成细胞悬液。以1∶2-3比率传代。用于实验的为2-3代代细胞，经V因子相关抗原(VR.Ag)的抗体检测，砍认为血管内皮细胞后方作为生物效应测定用细胞。

小鼠3T3成纤维细胞(FC)由第一军医大学珠江医院提供(培养基为1640培养基加20％小牛血清)。

本发明的胸腺蛋白口服液生物效应测定和CN92105643.5相同，即将各检测样品(胸腺蛋白口服液、成年猪胸腺蛋白、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)，按不同浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml)分别加入3孔细胞中平行检测。每份样品设立3孔空白对照(与盐水做对照)。

不同浓度的胸腺蛋白口服液对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖状况见图1、图2。

图1、图2提示，本发明的胸腺蛋白口服液对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)均有明显的促增殖生物效应，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)而且增殖效应与乳猪胸腺蛋白(TP)的最佳浓度有关(0.2mg--0.4mg/ml)。