[发明专利]病毒疫苗

说明书

本发明涉及病毒疫苗，特别是涉及以遗传工程手段改造的用作疫苗的突变病毒、含有突变病毒的疫苗、重组体细胞，以及生产疫苗的方法。

病毒疫苗一般分为两类。第一类是“被杀死的”疫苗，其为已经过适当化学物质如β-丙醇酸内酯处理后杀死的病毒制剂。第二类是活的“减毒”疫苗，其为经过对病毒基因组的特异性遗传操作，或更常见的是在某种类型组织培养系统中传代而降低了对宿主之致病性的病毒。这两种类型的疫苗均有其各自的缺点。因为被杀死的病毒疫苗不能在宿主内复制，所以必须注射给药，并因此而可能产生不适当的免疫反应。例如被杀死的脊髓灰质炎病毒制剂(即沙克疫苗)可产生免疫球蛋白(Ig)G抗体反应，但不能在原发感染的天然部位即肠内刺激IgA的产生。因此，虽然该疫苗能够保护机体免于发生脊髓灰质炎的神经系统并发症，但并不能阻断原发感染，且不能赋予“群体免疫力”。另外，杀死的病毒即不能进入宿主细胞内，也不能在其中复制。因此不能产生针对复制期间所产生的非结构蛋白质的任何有益免疫学反应，它们也不能刺激针对病毒抗原之胞毒性T细胞的产生。“死”抗原不能被抗原呈现细胞检拾并提供给T细胞。然而，可由Ⅱ类MHC分子呈现并导致对T辅助细胞的刺激作用。T辅助细胞又可帮助B细胞产生针对抗原的特异性抗体。为了刺激细胞毒性T细胞的产生，必须通过被感染细胞内的特殊途径加工病毒抗原，并作为被中断的肽片段出现在Ⅰ类MHC分子上。一般认为该降解途径对于那些在被感染细胞内合成的蛋白质是最为有效的，所以只有进入宿主细胞内并表达免疫原性病毒蛋白质的病毒才能产生病毒特异性胞毒性T细胞。因此，死疫苗是诱导抗病毒感染之细胞免疫力的不良诱导剂。从这一观点看，活的病毒疫苗更为可取。

迄今，已通过删除非必要基因或部分地损伤一个或多个必要的基因(在此情况下，损伤是使基因仍保留功能活性，但不能很有效地发挥作用)制成了活的减毒病毒。但活减毒病毒常常带有残留的致病性，而对宿主造成有害影响。另外，除非经特异性删除造成减毒，否则有可能逆转为更强毒力形式的病毒。但有一个事实是，在宿主中可产生某些病毒蛋白质，这意味着它们比那些不能产生病毒蛋白质的死疫苗更为有效。

活减毒病毒不仅其本身可用作疫苗，而且可作为其它基因的“疫苗载体”，换句话说即可携带来自须对抗之第二种病毒(或其他病原体)的基因。一般情况下。可使用痘病毒科的成员如牛痘病毒作为疫苗载体。当使用病毒作为疫苗载体时，重要的是它不能引起致病作用。换句话说，须以可使单纯病毒疫苗减毒的同样方法对其进行减毒。因此，在这种情况下应用时也会存在如上面所述的同样缺点。

已经发现，有可能从病毒基因组中删除某个基因，并提供一个所谓的“互补”细胞，进而由该细胞提供带有被删除基因之产物的病毒。这一方法已在某些病毒如腺病毒、疱疹病毒和反转录病毒中得以实现。对于腺病毒，是用5型腺病毒DNA的片段转化人细胞系(Graham，Smiley，Russell & Nairn，J.Gen，Virol，36，59-72，1977)。该细胞系表达某些病毒基因，并发现它能支持具有其已被删除或失活之基因的病毒突变体的生长(Harrison，Graham & Williams，Virology 77，319-329，1977)。虽然病毒能在该细胞系(“互补细胞系”)上很好地生长并产生了标准的病毒颗粒，但完全不能在正常人细胞上生长。已显示表达SV40病毒基因组(乳多空病毒)之T抗原编码区的细胞能够支持被特异性删除的病毒在该区域的复制(Gluzman，Cell，23，182-195，1981)。对于单纯性疱疹病毒，已产生了表达gB糖蛋白(Cai et al，J.Virol.62，714-721，1987)，gD糖蛋白(Ligas ang Johnson，J，Virol.62，1486，1988)和直接早期蛋白质ICP4(Deluca et al.J.Virol，56，558，1985)的细胞系，而且已表明这些细胞系能够支持带有相应基因特异性失活拷贝之病毒的复制。

本发明提供了用作疫苗的突变病毒，其中编码产生感染性病毒所必须之蛋白质的病毒基因已被删除或失活；且其中所说的病毒能在具有异源核苷酸序列的细胞中生长，所说的核苷酸序列可使所说的细胞表达由所说的被删除或失活之病毒基因编码的必要蛋白质。

本发明还提供了包含上述病毒，连同一种或多种赋形剂和/或佐剂的疫苗。病毒基因组本身可提供免疫原，或可含有表达该免疫原蛋白质的异源基因插入段。