[发明专利]一种菌体制剂的制造和应用方法

说明书

本发明属于微生物学，具体而言，属于通过生物工程制备具有生物调节和防病、增产功效的微生物制剂的方法。

现代农业促进作物增产的主要措施是肥水管理、改良品种和施用农药防治病、虫、杂草，但这些措施实施和发挥的效能有限，同时，施用化肥不仅能耗高，且易破坏土壤理化性质，施用化学农药还会造成环境污染、破坏生态平衡。为此，近年来世界各国都在积极研究植物病虫害的生物防治和生物调节，企望通过生物工程达到促进作物增产的目标。四十年代苏联的固氮菌、磷肥菌，五十年代英、美及澳大利亚的拮抗菌，七十年代初澳大利亚的放射土壤杆菌，七十年代末到八十年代初美国加利福尼亚州的“增产菌”，都是植物-微生物生态工程范畴。中国农科院植保所何礼远的《细菌在植物病害生物防治上应用研究的进展》一文（见《生物防治通报》1985，1（1）28-31），就这方面作了概要介绍;北京农业大学植病生防室陈延熙等人研制的“增产菌”在作物和蔬菜上也取得了一定的增产效果（见《生物防治通报》1985，1（2）22-24）。上述这些菌都属于土壤根际细菌，存在着作用单一（或增产或防病）、使用效果不稳定或菌剂生产困难、难于推广应用等缺点。因此，各国科学家仍在不断探索新的菌株及制剂，以满足农业发展日益增长的需要。

本发明的目的在于提供一种生产工艺简单、耗能低、使用方便、增产效果好、应用范围广的菌体制剂的制造和应用方法。

本发明涉及的微生物菌株为Pseudomonas sp.P751（以下简称P751）和Bacllus cereus BC752（以下简称BC752），均由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，登记入册的编号分别为CGMCC NO.9146及CGMCC NO.0147。

上述两株细菌根据B.E.布坎南等编的《伯杰细菌鉴定手册》（第八版P6、274、729），同属原核生物界（Klngdom  Procargotae），与光无关的原核生物（“暗细菌”）门2（Bacferia）、细菌纲（Bacfermycefes）。P751菌株属革兰氏阴性好氧杆菌和球菌，假单胞菌科（Pseudomonadaceae），假单胞菌属（Pseudomonas），其特性界于勒氏假单胞菌（P.lemolgnel  Delafleld），和睾丸酮假单胞菌（P.testosteroni  Marcus）间，因缺试剂睾丸酮无法定种，可能是该属中的新菌株，或是亚种或生物型水平不同的新菌株。BC752属芽孢杆菌和球菌，芽孢杆菌科（Bacillaceae）、芽孢杆菌属（Bacillus），蜡状芽孢杆菌（Baclllus  cereus  Frankland），Bacillus  cereus  BC752株，它与种的模式菌株水平上差异小，但本质不同，可能是亚种或生物型水平不同的新菌株，P751和BC752两菌株均从贵州马尾松针叶分离，其菌学性质为：

P751株：革兰氏阴性，杆状，大小0.5-0.6X1微米，无鞭毛，细胞内聚β-羟基丁酸颗粒;皿上划线培养，菌落园形、光滑、凸起、边沿整齐，半透明，乳白色（用马丁培养菌落呈桔黄色），大小1-1.5毫米，倒皿培养，菌落生在底层，多为椭圆形，也有圆形和不规则形;葡萄糖为氧化型产酸，氧化酶阳性，无精氨酸双水解酶，不利用精氨酸、甜菜碱、葡萄糖、果糖和阿拉伯糖，能利用羟基苯甲酸盐、石蕊牛奶产碱;好氧，适宜生长温度9-40℃，最适宜温度26℃左右，PH7-10。

BC752株：革兰氏阳性，杆形，大小1.4X2.8-3微米，芽孢中生，孢囊不明显膨大，细胞内有聚-β-羟基丁酸盐颗粒;皿上菌落圆扁形，白色，中心色浓，稍凸起，边沿稍透明，不很整齐，有念珠状“缘毛”;V.P和M.R试验阳性，氧化酶和接触酶阳性，利用丙二酸盐，石蕊牛奶胨化还原;兼性厌氧，适宜生长温度15-45℃，最适宜温度26℃左右，PH6-10。

本发明的菌体制剂的制造方法是：从松针上分离得到的原始群体，经纯化、生物测定筛选出P751和BC752纯菌种，将其移置试管斜面培养基上培养出一级种子，之后进行液体扩大培养，以活化菌种、扩大菌量，最后进行万瓶培养而制成制剂成品。