[其他]重组产品

权利要求书

1.一种制备灭活素氨基酸顺序编码cDNA序列的方法，该方法包括：

从真核细胞获得RNA；分离出mRNA；合成与所述mRNA互补的双链DNA；将所述DNA序列插入一个独立复制的克隆载体中，构成重组克隆载体；用该重组克隆载体转化宿主细胞；筛选转化的宿主细胞，其中所插入的DNA序列应编码灭活素全部、部分氨基酸顺序、以及灭活素的类似物、同源物、衍生物或其结合物的DNA序列；鉴定所述转化宿主细胞中克隆载体上插入的DNA序列。

2.一种产生灭活素编码cDNA或具有灭活素生物学或免疫学活性分子的编码cDNA的方法，以及该分子在重组体宿主中表达的方法，该方法包括：    

a)从适当的细胞株中分离mRNA，

b)由mRNA构建cDNA文库，

c)从所构建的cDNA文库(b)克隆于合适的宿主，如大肠杆菌或λ噬菌体，    

d)鉴定含灭活素基因的全部、部分、类似物、同源物、衍生物或其结合的克隆载体。

3.根据权利要求2的方法，其中克隆的鉴定是通过：

a)杂交筛选翻译；

b)与一个化学合成的DNA序列探针杂交，特别是与一个据本发明所合成的寡核苷酸的探针杂交；

c)使用标记的cDNA进行鉴别杂交，该cDNA由诱导或非诱导的mRNA合成的；

d)使用抗灭活素抗体或其他免疫相关分子对cDNA表达文库进行免疫筛选；

e)用标记的尿激酶或尿激酶及其抗体筛选cDNA表达文库的生物学活性。        

4.根据权利要求2或3的方法，此方法还包括克隆基因的扩展。

5.一种产生灭活素编码cDNA或具有灭活素生物学或免疫学活性的分子的编码cDNA的方法，以及该分子在重组宿主中表达的方法，该方法包括：

A.诱导细胞株以刺激灭活素产生和表达；    

B.从合适的细胞株分离mRNA；

C.mRNA的体外翻译以及通过与尿激酶形成复合物对灭活素翻译产物进行免疫沉淀；

D.由(B)项得到的mRNA进行分级分离，并鉴定含灭活素翻译活性的组分；    

E.由(B)和(D)项得到的mRNA构建cDNA文库；

F.(E)项所构建的cDNA文库克隆到合适的宿主，如大肠杆菌或λ噬菌体；

G.通过下述步骤鉴定含灭活素基因的克隆：

a)使用(C)项方法进行杂交一筛选翻译，

b)与一个化学合成的DNA序列探针杂交，特别是与按本明所合成的寡核苷酸的探针杂交，

c)由诱导和非诱导的mRNA合成标记的cDNA进行鉴别杂交，

d)用抗灭活素抗体或其他免疫相关分子对cDNA表达文库进行免疫筛选，

e)用标记的尿激酶或尿激酶及其抗体以生物学活性对cDNA表达文库进行筛选；        

H.由部分灭活素基因序列，特别是本发明范围内所公开的寡核苷酸序列而获得的寡核苷酸引物制备cDNA文库，从而扩展克隆基因；

I.灭活素基因核苷酸序列的确定；    

J.灭活素基因在大肠杆菌中的表达；

K.通过在其他宿主上进行克隆，如真核细胞，表达有生物学活性的重组灭活素；

L.重组灭活素的纯化及其生物学特性的临床评价。