[发明专利]一种重组蛋白生产工艺

权利要求书

1.一种重组蛋白生产工艺，包括

S1、将目的基因构建到表达载体上；

S2、用构建质粒转化表达菌，LB平板37℃；

S3、LB平板上挑选单一菌落接入LB培养基,37℃进行培养；

S4、将菌液接入液体培养基中加入IPTG进行诱导；

S5、培养好的菌液进行离心，弃去上清，形成悬浮液；

S6、向悬浮好的菌液内加入蛋白抑制剂，冰浴放置；

S7、进行超声破碎，破碎后进行离心；

S8、用PBS缓冲液平衡GST柱，上样结合并搅拌流干；

S9、用PBS缓冲液清洗非特异性蛋白，流干，加入洗脱缓冲液洗脱；

S10、进行纯化；

其特征在于：S2、S3、S4在恒温箱内进行操作，所述恒温箱包括箱体，所述箱体底部设置有震动装置，所述箱体内壁上还设置有温控装置和通气装置；所述震动装置包括放置平台和驱动单元，所述放置平台与所述箱体内壁之间存在空隙，所述驱动单元设置在所述放置平台和所述箱体底壁之间，并固定在所述箱体底壁上，并与放置平台的相对位置保持固定，所述箱体内部还设置有充气装置和温控装置。

2.根据权利要求1所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：S5、S7在破碎离心一体机内操作，所述破碎离心一体机包括隔音箱、超声探头和离心底座，离心底座和超声探头分别设置在隔音箱内的上下两侧，所述超声探头朝离心底座延伸，所述离心底座内转动设置有容器套，所述容器套用于放置装有细胞的容器，所述超声探头远离所述离心底座的一端连接有升降臂。

3.根据权利要求2所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述容器套的顶端通过转轴与所述离心底座连接，所述离心底座内设置有滑槽，滑槽形状与所述容器套底端的转动轨迹相同，所述滑槽的两端设置有限位槽，所述容器套卡入限位槽并保持固定。

4.根据权利要求3所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：优选的，所述驱动单元包括若干个伸缩气缸，所述伸缩气缸的顶端设置有连接块，所述放置平台底部设置有用于卡接所述连接块的连接槽，所述连接块优选为球型，所述连接槽优先为容积与连接块体积相当的球型，所述伸缩气缸分布在所述放置平台的四周，并连接至PLC程序。

5.根据权利要求4所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述容器套的顶端通过转轴与所述离心底座连接。

6.根据权利要求5所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述离心底座内设置有滑槽，滑槽形状与所述容器套底端的转动轨迹相同。

7.根据权利要求6所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述滑槽的两端设置有限位槽，所述容器套卡入限位槽并保持固定。

8.根据权利要求1所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：S3中LB培养基为5mL，培养时间为3-5小时；S4中将5mL菌液接入1LLB液体培养基中，37℃培养至OD60≈0.6，加入0.3mmol/L的IPTG，16℃诱导16h；S5中离心转速为5000r/min，时间为10分钟。

9.根据权利要求1所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：S7中超声破碎每个循环26次，超声6s，间隔5s，视破碎效果共2～4个循环，破碎后的菌4℃1800r/min，离心30min，上清保持在4℃；S8中上样结合30～60min，每5～10min搅拌一次。