[发明专利]细胞培养容器、细胞培养装置及细胞培养方法

说明书

本申请涉及细胞核检测技术领域，具体涉及细胞培养容器、细胞培养装置及细胞培养方法。该细胞培养容器包括微腔体阵列、基底、进口和出口。微腔体阵列具有多个微腔体，微腔体具有第一开口、第二开以及于第一侧壁，第一开口具有第一宽度，第二开口具有第二宽度，第一宽度大于第二宽度以将细胞限制在微腔体中。通过该细胞培养容器、细胞培养装置及细胞培养方法，提供三维细胞球体更好的生长环境和条件，使得其更接近其体内的三维生长环境，细胞的生长状态更佳，尤其是在培养干细胞时能够最大程度地保持干细胞的“干性”，也即减少其“自发”分化趋势。

技术领域

本申请涉及细胞核检测技术领域，具体涉及细胞培养容器、细胞培养装置及细胞培养方法。

背景技术

细胞培养容器(例如细胞培养瓶，25cm²、75cm²、175cm²和225cm²)可提供用于培养细胞的无菌微腔体。在一些实施方式中，培养细胞可提供关于疾病和毒理学研究，药剂和治疗的功效，肿瘤特性、生物体、遗传学以及细胞和与细胞相关的其他科学、生物学和化学原理的信息。在培养期间，细胞培养容器提供无菌、液体不可渗透的微腔体来容纳细胞。

微腔体或细胞生长室可包括底表面、顶表面和具有表面的侧壁。这些表面中的至少一个表面可适于细胞生长。例如，为了建立球体细胞培养的基础，细胞生长表面可包括多个微腔体(例如，微米尺寸的孔、亚毫米尺寸的孔穴)，它们例如以阵列排列。细胞生长表面可与细胞培养瓶一体，或者可以是放置在或固定在细胞生长室中的单独的基材。顶表面、底表面、一个或多个侧表面或它们的组合可包括成阵列的微腔体。例如，微腔体可以波状或正弦形状形成，从而形成具有圆化顶部和圆化底部的微腔体或微孔穴。在一些实施方式中，细胞培养瓶可填充有促进三维细胞培养物(例如细胞团、球体)的生长的材料(例如，培养基、固体、液体、气体)。例如，可向细胞培养室添加包含细胞并且细胞悬浮在液体中的培养基。悬浮的细胞可被聚集在多个微腔体中并且可形成(例如，生长)为细胞组或细胞簇。成组或成簇的细胞在三个维度上生长以形成三维细胞或细胞团或细胞体，其能够大致呈球状，因此在本文中可被称为球体或类器官。

在一些现有技术中，提供的细胞培养表面具有微腔体阵列的细胞培养室可用于培养球体阵列，并且每个球体位于其自身的微腔体中。例如，CN111094535A8公开了一种细胞培养容器具有侧壁和底表面。在实施方式中，底表面是具有多个微腔体的细胞培养表面。在实施方式中，细胞培养表面是附接于侧壁的基材。在实施方式中，侧壁附接于基材，使得围绕细胞培养表面的周围没有平坦表面。其说明书干公开了，多个微腔体320中的每个微腔体320a、320b、320c可包括限定孔穴322a、322b、322c的凹表面321a、321b、321c以及开口323a、323b、323c。液体通过开口323a、323b、323c进入和离开微腔体。在细胞培养室中没有平坦区域用于细胞沉降在上面。这对于确保细胞不沉降在微孔穴之外的细胞培养室中是重要的。当细胞在微孔穴之外沉降在细胞培养表面之外的平坦区域上时，细胞可生长为不规则的细胞聚集团801(参见图35A和35B、36A和36B)，并且在容器中产生不均匀的多细胞三维结构群。在实施方式中，细胞培养表面基本上由多个微腔体组成。由此可见，其公开了一种通过在细胞培养表面设置非平坦区域，以避免形成不规则细胞聚集团，以更有利于细胞进行三维生长。

然而，对于一些干细胞在这些非平坦区域的细胞培养表面培养时，其干细胞容易丧失自我更新能力、易老化，或“自发性”分化成为骨细胞、间质细胞或脂肪细胞，不利于干细胞的长期体外培养，例如，Kim J，Jin W K，Park J H，et al.Biologicalcharacterization of long-term cultured human mesenchymal stem cells[J].Archives of Pharmacal Research，2009，32(1):117-126.)也有发现。

发明内容