[发明专利]一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法及延长产蛋期的方法

说明书

本发明公开了一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法及延长产蛋期的方法，包括体内氧化应激模型的建立和体外氧化应激模型的建立。体内氧化应激模型的建立，包括：选取高产期蛋鸡，连续注射地塞米松15d，剂量为20mg/kg，后15d注射等量生理盐水。体外氧化应激模型的建立，包括：分离培养蛋鸡卵巢原代颗粒细胞，接种于培养板，采用50umol/L的Hsubgt;2/subgt;Osubgt;2/subgt;处理卵巢原代颗粒细胞6h。本发明采用上述的一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法及延长产蛋期的方法，能够探究蛋鸡卵巢衰老的原因，通过褪黑素延长蛋鸡的产蛋期，并在基因水平上做出解释。

技术领域

本发明涉及家禽饲养技术领域，尤其是涉及一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法及延长产蛋期的方法。

背景技术

随着家禽业集约化程度的提高，养殖环境与动物生物学特性背离的增加，以及各种环境应激造成的机体与组织活性氧(ROS)的增加，使机体产生氧化应激反应，最终会导致家禽的生产性能下降。

蛋鸡的产蛋性能主要取决于卵巢中生殖细胞以及卵泡的生长发育水平，而卵泡内数量、比重以及功能最多的细胞是颗粒细胞，其增殖分化和凋亡主导卵泡的发育，决定卵泡的闭锁，闭锁卵泡的数量直接影响产蛋率的高低。目前，有关蛋鸡的卵巢氧化应激的研究其系统性、探究的机理性并不完善，多数研究只针对如何建立体内氧化应激模型或体外氧化应激模型进行研究，研究方面单一，并未对引起蛋鸡氧化应激的机制作出解释，也未给出如何缓解蛋鸡卵巢的氧化应激，即当前建立蛋鸡卵巢氧化应激模型与缓解氧化应激均为单独的研究，二者并没有很好的结合起来。有研究对褪黑素缓解氧化应激作出了研究，但是并未解释褪黑素如何缓解蛋鸡卵巢氧化应激。因此，为了探究氧化应激造成蛋鸡卵巢功能损伤从而降低产蛋期的机制，以及褪黑素缓解蛋鸡卵巢氧化应激从而延长产蛋期的机制，亟需一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法及延长产蛋期的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法及延长产蛋期的方法，能够探究蛋鸡卵巢衰老的原因，通过褪黑素延长蛋鸡的产蛋期，并在基因水平上做出解释。

为实现上述目的，本发明提供了一种蛋鸡卵巢氧化应激模型建立方法，包括体内氧化应激模型的建立和体外氧化应激模型的建立。

优选的，所述体内氧化应激模型的建立，包括以下步骤：选取高产期蛋鸡，连续注射地塞米松15d，剂量为20mg/kg，后15d注射等量生理盐水；进行预实验7d，试验期30d，饲粮为玉米-豆粕型基础饲粮；

所述预实验和试验期温度均为21-25℃，相对湿度为55-75％，光照条件为16L：8D，试验期间所有蛋鸡自由采食、自由饮水。

优选的，所述饲粮包括以下质量份的原料组成：玉米62份，豆粕24份，大豆油1份，鱼粉2份，磷酸氢钙1份，石粉9份，氯化钠0.32份，蛋氨酸0.12份，苏氨酸0.1份，氯化胆碱0.1份，预混料0.3份，植酸酶0.02份，赖氨酸0.04份。

优选的，所述体外氧化应激模型的建立，包括以下步骤：分离培养蛋鸡卵巢原代颗粒细胞，接种于培养板，采用50umol/L的H₂O₂处理卵巢原代颗粒细胞6h。

本发明还提供了一种蛋鸡卵巢氧化应激延长产蛋期的方法，在建立上述的体内氧化应激模型的同时，选取相同数量的高产期蛋鸡，连续注射地塞米松15天，剂量为20mg/kg，后15天注射等量褪黑素；进行预实验7d，试验期30d，饲量为基础日粮；通过生产性能、蛋品质、血液指标、不同发育阶段卵泡数量、细胞凋亡相关基因、抗氧化基因、FOXO1表达、卵巢Bcl-2、SOD1、FOXO1蛋白表达趋势对产蛋期进行检测；

优选的，所述生产性能包括每天产蛋总数、总蛋重、每周饲粮消耗量、平均蛋重、产蛋率、平均日采食量、料蛋比；

优选的，所述蛋品质包括蛋形指数、蛋壳强度、蛋壳厚度；