[发明专利]一种人脐带近全能干细胞的分离方法及其装置

说明书

本发明公开了一种人脐带近全能干细胞的分离方法及其装置，包括以下步骤：S1、取新鲜采集的胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除残留血迹；S2、去除最外层膜、静脉及动脉，并将脐带剪碎成组织块；S3、放入到Ⅳ型胶原酶与胰酶的混合溶液中，在温度为37℃下进行20‑25min消化；S4、加入FBS终止消化，获得细胞滤液；S5、将获得的细胞滤液在37℃的温度下进行离心，弃上清，得脐带间充质干细胞沉淀；S6、将脐带间充质干细胞沉淀，接种至培养基中进行培养。还包括同时用作消化分离及离心的装置，在消化分离及离心分离时均能确保恒温，本发明分离效果好，并且不需要准备太多设备，减少更换设备使用的次数，操作更加简单方便。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种人脐带近全能干细胞的分离方法及其装置。

背景技术

近全能干细胞也成亚全能干细胞，是指具有三胚层分化潜能的一类干细胞亚群，在特定环境下，理论上可以诱导分化为人体任何一种组织细胞，主要来源于人体中广泛存在的间充质组织，特别是骨髓、脂肪、脐带和胎盘等间充质组织，由于脐带和胎盘来源的亚全能干细胞具有更为原始和更为强大的增值能力，较强的分化能力，低免疫原性和免疫调节功能，其在临床上的应用价值越来越受人们关注。

人脐带间充质干细胞(MSC)是一群具有高度自我更新能力和分化潜能的成体干细胞，在适当的诱导条件下能向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞和神经细胞等多种组织细胞分化，加之其具有免疫调控、分泌细胞因子、取材方便等优点，MSC的分离、培养、分化、诱导植入等研究备受关注，在细胞治疗、组织工程等领域显示出日益广阔的应用前景。

要达到临床应用的细胞数量级及应用效果，对原始干细胞的数量、活力及分化能力要求很高，就需要对原始干细胞进行分离培养，胶原酶消化法是比较常见的分离方法，其中胶原酶消化结束后需要进行离心，并且需要保持恒温消化，因此在进行分离时需要准备很多设备，并且过程中不断更换使用，操作麻烦。

发明内容

本发明的目的是提供一种人脐带近全能干细胞的分离装置，分离效果好，并且不需要准备太多设备，减少更换设备使用的次数，操作更加简单方便。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种人脐带近全能干细胞的分离方法，包括以下步骤：

S1、取新鲜采集的胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除残留血迹；

S2、去除最外层膜、静脉及动脉，并将脐带剪碎成组织块；

S3、放入到Ⅳ型胶原酶与胰酶的混合溶液中，在温度为37℃下进行20-25min消化；

S4、加入FBS终止消化，获得细胞滤液；

S5、将获得的细胞滤液在37℃的温度下进行离心，弃上清，得脐带间充质干细胞沉淀；

S6、将脐带间充质干细胞沉淀，接种至培养基中进行培养。

进一步优选的：步骤S2中，脐带剪碎成0.2～0.3cm的组织块。

进一步优选的：步骤S3中，Ⅳ型胶原酶与胰酶按1:1的体积混合，Ⅳ型胶原酶的浓度为0.1-0.2mg/mL，胰酶的浓度为0.1％-0.15％。

本发明还公开了一种人脐带近全能干细胞的分离装置，包括上端开口的壳体，所述壳体开口端的一边铰接有盖体，所述壳体的底部设置有剪式升降机构，所述剪式升降机构内设置有用于驱动其升降的伸缩电机，所述剪式升降机构的上端设置有安装平台；