[发明专利]一种水体毒害污染物的生态健康安全评价方法

权利要求书

1.一种水体毒害污染物的生态健康安全评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、转基因斑马鱼从胚胎阶段起，在待测污染物中暴露至成鱼阶段；

S2、构建三种斑马鱼损伤模型：

1)构建机械损伤斑马鱼模型：将斑马鱼尾鳍处进行机械断尾处理；

2)构建炎症刺激斑马鱼模型：将脂多糖溶于斑马鱼曝气水中，诱导斑马鱼；

3)构建细菌感染斑马鱼模型：加入嗜水气单胞菌至斑马鱼曝气水中，刺激斑马鱼；

S3、将步骤S2构建的三种斑马鱼损伤模型进行荧光成像实验，根据荧光面积和荧光强度的分布分别解析免疫细胞的数量和免疫细胞的分布情况。

2.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述脂多糖的质量浓度为10μg/mL～20μg/mL。

3.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述嗜水气单胞菌的浓度为10⁶CFU/mL～10⁸CFU/mL。

4.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述待测污染物包括多环芳烃及其衍生物，抗生素类，塑料添加剂类中的至少一种。

5.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述待测污染物的环境相关剂量为10ng/L～20μg/mL。

6.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述构建机械损伤斑马鱼模型中，机械断尾处理1h。

7.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述步骤2)和步骤3)中，所述诱导的时间为24h，所述刺激的时间为24h。

8.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述构建细菌感染斑马鱼模型的具体步骤包括：

将嗜水气单胞菌接种至液体培养基中，震荡过夜，然后将液体培养基置于低温环境中离心，重新悬浮，再稀释至曝气水中至所述嗜水气单胞菌的浓度为10⁸CFU/mL，刺激斑马鱼。

9.如权利要求8所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述低温环境下的温度为0～4℃，所述低温环境中离心的速度为3000g，离心的时间为5～10min。

10.如权利要求1所述的生态健康安全评价方法，其特征在于，所述步骤S3中，将步骤S2构建的三种斑马鱼损伤模型和野生对照鱼置于黑色背景的成像盘上，分别选用波长为488-507和波长为561-587的窄带发射滤光片进行免疫细胞成像，准确统计荧光面积和荧光强度，通过和整鱼的面积校准表示为免疫细胞的数量，根据荧光强度的分布解析免疫细胞的分布情况。