[发明专利]自发型皮肤型红斑狼疮动物模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种自发皮肤型红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）构建角质形成细胞条件性PPARγ敲除小鼠，所述角质形成细胞条件性PPARγ敲除小鼠为Krt5-CreERT2+/- PPARγ flox/flox-/-的C57BL/6小鼠；

（2）使用基因敲除激活剂小范围敲除角质形成细胞中的PPARγ基因以介导疾病表型发生；所述小范围敲除为对角质形成细胞条件性PPARγ敲除小鼠单耳腹侧及背侧的皮肤、或身上≤4 cm²的无毛或剃毛皮肤施用基因敲除激活剂。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述基因敲除激活剂为代谢后可与雌激素受体突变体ERT结合，使CreERT2发挥Cre重组酶活性进行基因敲除的化合物。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述基因敲除激活剂为4-羟基他莫昔芬。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，4-羟基他莫昔芬的使用方式为外用涂抹、皮肤贴敷、有针或无针化的皮下注射或皮内注射中的任意一种。

5. 根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，对角质形成细胞条件性PPARγ敲除小鼠单耳腹侧及背侧的皮肤、或身上≤4 cm²的无毛或剃毛皮肤连续涂抹4-羟基他莫昔芬溶液1-7天，每天一次。

6. 根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述4-羟基他莫昔芬溶液按照50mg4-羟基他莫昔芬、1ml DMSO、3-49ml玉米油的比例配置；每次给小鼠外用涂抹的4-羟基他莫昔芬溶液的剂量为10-80μl。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，小鼠在初次外用涂抹4-羟基他莫昔芬7-12天后出现疾病表型。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述角质形成细胞条件性PPARγ敲除小鼠通过如下方法构建得到：

将PPARγ flox/flox和Krt5-CreERT2小鼠交配，得到杂交生成子一代，保留基因型为PPARγ flox/flox+/- Krt5-CreERT2+/-的杂合子小鼠，将杂合子小鼠相互交配繁育得到基因型为PPARγ flox/flox-/- Krt5-CreERT2+/-的小鼠。

9.权利要求1-8任一项所述的构建方法构建得到的自发皮肤型红斑狼疮动物模型在研究CLE疾病机理上的应用。

10.权利要求1-8任一项所述的构建方法构建得到的自发皮肤型红斑狼疮动物模型在筛选靶向治疗狼疮皮损的药物中的应用。