[发明专利]一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法

权利要求书

1.一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基，其特征在于：该补料培养基包括质量比为1:5-20的氢氧化钠与葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的补料培养基，其特征在于：所述的氢氧化钠在所述的补料培养基中的浓度小于等于50g/L，所述的葡萄糖在所述的补料培养基中的浓度小于等于500g/L。

3.使用权利要求1或2所述的补料培养基的补料方法，其特征在于：包括如下步骤：将权利要求1所述的补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接，根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量即成。

4.根据权利要求3所述的补料方法，其特征在于：所述的碱泵的流速为5-10mL/min；所述的碱泵的每次开启时间为1-30s；所述的发酵培养基的pH值的检测周期为1-30s。

5.根据权利要求3所述的补料方法，其特征在于：补料培养基补入后发酵培养基的pH值与补入前发酵培养基的pH值之差小于等于0.1。

6.一种用于双歧杆菌高密度培养的发酵培养基，其特征在于：该发酵培养基包括如下重量份的组分：

大豆蛋白胨10-20份，酵母粉10-20份，葡萄糖7-15份，可溶性淀粉0.2-2份，氯化钠0.7-1.5份，磷酸氢二钾0.5-2份，磷酸二氢钾0.5-2份，FeSO₄·7H₂O 0.001-0.01份，MnSO₄0.001-0.01份，MgSO₄ 0.05-1份，L-半胱氨酸0.1-2份，蒸馏水1000份。

7.一种用于双歧杆菌高密度培养的发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将双歧杆菌种子液接种至权利要求6所述的发酵培养基中进行发酵；

(2)将权利要求1或2所述的补料培养基通过碱泵与步骤(1)中的发酵培养基连接，根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量；

(3)在发酵过程中，间隔1小时对发酵培养基取样，检测580nm-620nm下的吸光度值，并检测葡萄糖浓度与活菌数目，当吸光度值大于0.5且相邻2次取样的吸光度值相等或降低即为发酵结束。

8.根据权利要求7所述的用于双歧杆菌高密度培养的发酵方法，其特征在于：所述的步骤(1)中的发酵步骤的温度为35-38℃，搅拌转速150-250r/min。

9.根据权利要求7所述的用于双歧杆菌高密度培养的发酵方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的碱泵的流速为5-10mL/min；所述的碱泵的每次开启时间为1-30s；所述的发酵培养基的pH值的检测周期为1-30s；补料培养基补入后发酵培养基的pH值与补入前发酵培养基的pH值之差小于等于0.1。

10.根据权利要求7所述的用于双歧杆菌高密度培养的发酵方法，其特征在于：所述的双歧杆菌为两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌或短双歧杆菌中的至少一种；所述的补料培养基中的碳源的质量浓度为所述的发酵培养基中的碳源的质量浓度的5-40倍。