[发明专利]一种钟器腐霉的特异性检测靶标Pve_contig_43及其应用

说明书

本发明公开了一种钟器腐霉(Phytopythiumvexans)的检测靶标Pve_contig_43及其检测引物，该检测靶标Pve_contig_43的DNA序列如SEQ ID NO：1所示，蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。同时，还公开了特异性检测靶标Pve_contig_43的PCR检测技术的特异性引物组合，其正向引物序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物序列如SEQ ID NO：4所示。同时，本发明所发掘的检测靶标和其设计的引物组合用于普通PCR，其特异性强，灵敏度高，证明Pve_contig_43适合钟器腐霉的检测靶标，为钟器腐霉(Pp.Vexans)的检测提供了技术平台。

技术领域

本发明属于钟器腐霉检测技术领域，具体涉及一种钟器腐霉(Pp.vex ans)的特异性检测靶标Pve_contig_43及其应用。

背景技术

钟器腐霉是腐霉属，寄主植物广泛，可侵染各种蔬菜、果木、茶叶、甘蔗、薯类、麦类等植物。菌落在CMA上呈放射状，菌丝分枝，较细，粗1.5-5.4μm。孢子囊球形、梨形或卵形，顶生或间生，直径12-30(平均16.7)μm，游动孢子肾形，双鞭毛，休止时球形，直径约12μm。藏卵器球形，平滑，顶生，有时间生或切生，直径14-27(平均21.5)μm。雄器钟状或不规则，顶生，同丝生，较少异丝，5.2-44.8μm×5.1-8.6μm，平均17.92μm×6.99μm。每一藏卵器有1-2个雄器。卵孢子球形，12-27(平均18.7)μm，壁厚(1.5-1.7)-(2.2-3.0)μm。

目前全世界报道的腐霉有200多种，其中超过80种为植物重要的病原菌，危害多种作物，引起猝倒、根腐和茎腐等症状，如瓜果腐霉(Ph ytopythium aphanidermatum)、德巴利腐霉(Phytopythium debaryanum)和终极腐霉(Phytopythium ultimum)均能侵染烟草引起猝倒病。钟器腐霉在马来西亚、印尼、印度、日本、巴西、英国、美国等27个国家，在我国云南、海南、广西、宁夏、北京和陕西等地均有报道，曾在河南省引起烟草茎根腐病。

为了阻止钟器腐霉(Pp.vexans)病原菌的传播，需要对其进行快速、准确地检测，发掘特异性好的靶基因是目前所有检测技术的核心。不同的靶标序列检测的特异性和灵敏度存在一定的差距，因此选择的目标靶序列不同、片段大小不同，结果都会有很大差别。靶标基因的选择要确保其在种内的不同菌株间的高度保守，而在种间变异性较高。虽然现有技术中也有针对Pp.vexans的快速分子检测，但是其检测靶标灵敏度并不高。

综上所述，发掘高信赖度特异性分子检测靶标并基于新靶标建立灵敏、准确的检测技术体系对提升对Pp.vexans的快速分子检测研究所致病害早期诊断具有重要作用。

发明内容

针对现有技术中Pp.vexans生物学检测方法所需周期长、检测方法特异性差、灵敏度低、特异性检测靶标较少的问题，本发明提供一种新的Pp.vexans的检测靶标Pve_contig_43及基于新检测靶标的PCR检测引物组合物。