[发明专利]一种用于人血清和血浆中全谱脂溶性维生素及其代谢物检测的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种用于人血清和血浆中全谱脂溶性维生素及其代谢物检测的试剂盒，包括样本前处理试剂，所述的前处理试剂中包括：水、使用浓度为60%‑80%（V/V）的甲醇水溶液和甲基叔丁基醚。本发明还提供了该试剂盒用于检测血液样本的方法。通过验证血清和血浆基质，确保各方面参数符合要求。试剂盒测试结果批内批间精密度好，准确度高。该试剂盒用于血清和血浆中脂溶性维生素检测，为临床项目准确定量，并且能够满足临床需求。

技术领域

本发明属于疾病诊断试剂盒领域，具体涉及一种用于人血清和血浆中全谱脂溶性维生素及其代谢物检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

维生素是维持人和动物正常生理功能的重要物质，这类物质必须从食物中获得，在人类的生长发育和代谢中发挥着重要的作用。维生素分为水溶性维生素和脂溶性维生素两大类，其中脂溶性维生素主要包括维生素A(VA)、维生素D(VD)、维生素E(VE)和维生素K(VK)等。

维生素A与视力、生长发育、免疫系统相关，缺乏维生素A会引起夜盲症，干眼症，皮肤病，免疫功能低下，儿童生长发育迟缓等；维生素D是一种脂溶性维生素，主要由维生素D2、维生素D3两种活性成分组成，维生素D在肝脏内被转化为25-羟基维生素D，临床上以25-羟基维生素D作为评价体内维生素D营养水平的指标；维生素E是重要的生物氧化剂，缺乏维生素E会引起贫血、免疫低下、神经系统退行性病变。维生素K参与凝血因子的合成和骨骼中钙磷代谢。因此，脂溶性维生素的检测可评估患者体内的脂溶性维生素的营养状况。对脂溶性维生素缺乏或过量的临床判断、治疗管理和生理评估具有辅助诊断的意义。

脂溶性维生素的传统检测方法有比色法、紫外失活分光光度法、荧光法及微生物法等。这些方法只能测定某一种维生素的含量，操作步骤复杂，血样样本量大，且结果不稳定，干扰因素多，因此需要建立一种灵敏、准确、快速的分析方法。

申请号为CN202110241142.7的中国专利中公开了：一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的样品前处理方法。该发明提供了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的样品前处理方法，通过采用特定的蛋白沉淀剂，并与内标准品工作液混合成内标溶液，从而简单高效地完成样品前处理，无需任何额外的样品富集等操作，即可显著提高血清样品中脂溶性维生素A、E、K1、K2的回收率，降低样品前处理的成本，从而大幅提升血清中脂溶性维生素检测的灵敏度，并能保证检测结果的准确性和稳定性。但是由于前处理方法过于简单，并且K1、K2在血清中浓度很低，该专利中未体现各项目的定量下限，数据不够完整，缺乏可信度。

申请号为CN202011615598.7的中国专利中公开了：用于检测脂溶性维生素的试剂盒和检测方法，该试剂盒包括：至少三瓶脂溶性维生素校准品、至少三瓶脂溶性维生素质控品、混合内标蛋白沉淀剂、流动相添加剂以及提取液；脂溶性维生素包括维生素A、维生素E、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、维生素K1和维生素K2；混合内标蛋白沉淀剂包括含有蛋白沉淀剂、维生素A-d3内标物、维生素E-d6内标物、25-羟基维生素D2-d3内标物、25-羟基维生素D3-d6内标物、维生素K1-d7内标物和维生素K2-d7内标物的混合溶液；流动相添加剂包括含有甲酸的甲醇溶液以及含有甲酸的乙腈溶液。该发明能够同时检测多种脂溶性维生素，但是标准曲线需要结合质控品确定准确性问题，并且需要确定标准曲线方程的斜率和截距是否分别在预设的范围内，可行之后再移取上清液进行实验，方法较为复杂，并且耗时较长，容易引起较大实验误差，不利于样本准确检测。

开发操作更简单、效率更高、结果更准确、灵敏度更高的脂溶性维生素检测试剂盒和检测方法十分必要。

发明内容