[发明专利]一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用。本发明序列是针对2019‑nCOV的Nsp12基因，可有效抑制病毒复制的RNA依赖的RNA聚合酶的功能。其中SS1的部分核糖有2’‑OMe和2’‑F修饰，AS1的部分核糖有2’‑OMe和2’‑F修饰。本发明提供的siRNA能够控制感染新型冠状病毒的症状，可作为抗新冠病毒药物开发的有效靶点，为治疗新冠病毒的小核酸药物开发提供依据。

技术领域

本发明涉及一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

新型冠状病毒SARS-CoV-2，由该病毒引起的疾病被称为COVID-19。SARS-CoV-2主要通过接触途径和气溶胶途径传播。病毒进入人体后，其表面的刺突糖蛋白(S蛋白)与宿主细胞表面的受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合然后进入细胞。进入细胞的SARS-CoV-2病毒内化后释放出遗传物质RNA，宿主细胞利用胞内原料对其基因序列进行复制和翻译，进而组装形成大量的子代病毒，子代病毒随后通过胞吞途径释出细胞，开始对其他的宿主细胞进行新一轮感染。ACE2主要表达在于我们肺、喉咙和肠道的细胞表面，因此这些器官也最容易受到SARS-CoV-2病毒的攻击。

在新冠治疗药物方面，主要分为两种，分别是以瑞德西韦(Remdesivir)和莫诺拉韦(Molnupiravir)为代表的核苷类似物，以及以维德到帕克斯(Paxlovid)和格雷斯(Xocova)为代表的病毒蛋白酶抑制剂。其中辉瑞公司的Paxlovid由于临床疗效显著，副作用也相对较轻而成为主流新冠治疗药物。然而，Paxlovid常常与一些常用药物产生交叉反应，引起严重的副作用，这大大限制了新冠治疗药物对高危人群的覆盖范围。此外，病毒蛋白酶抑制剂药物在过去治疗HIV/AIDS和丙型肝炎中，最后由于病毒产生耐药性而快速失效，国外也发现了耐蛋白酶抑制剂的新病毒变异体。所有这些说明在新冠病毒感染迅速蔓延的情况下，仍需继续推进新药研发，提前为下一代药物做好准备。在预防医学方面，临床资料显示，疫苗并不能有效阻断病毒的感染和传播。在缺乏有效药物的情况下，目前的防疫策略被迫退守，重点放在降低重症和死亡率，无法主动出击，阻止病毒传播。

SARS-CoV-2基因组复制由Nsps蛋白主导的多亚基复制/转录复合物介导，其核心成分为RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，RdRp的核心位点为催化亚基nsp12。NSP12属于非结构蛋白(nsp)，它有两个辅因子NSP7和NSP8。nsp12以一种引物依赖的方式催化三磷酸核苷(NTPs)，然后形成磷酸二酯键，与nsp7和nsp8形成复合物后，获得了连续合成大RNAs的能力。此外，nsp8还具有引物酶特性，可以催化RNA引物的合成，从而使新型冠状病毒能够从头合成RNA。冠状病毒家族的RdRp高度保守，SARS-CoV-2与SARS-CoV RdRp的氨基酸序列相同96％。虽然已经获得了大量关于SARS-CoV-2RdRp蛋白的结构信息，但针对该靶点的药物开发相对缺乏。目前，RdRp抑制剂包括瑞德西韦(Remdesivir)、法匹拉韦(Favipiravir)、加里斯韦(Galidesivir)等广谱抗病毒药物。瑞德西韦(Remdesivir)，又译伦地西韦，商品名Veklury，是由美国吉利德科学公司开发的一种新型实验性广谱抗病毒药物，用来针对埃博拉病毒及被认为可以有效抑制呼吸道上皮细胞中SARS病毒和MERS病毒的复制。瑞德西韦本身是前药，经生物转化作用变为核糖核苷酸类似物之抑制剂，能够抑制病毒的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)。FDA批准瑞德西韦成为第一个治疗2019冠状病毒病的药物。但是世卫组织支持的研究结果发现该药物对该病毒疗效甚微。