[发明专利]Oligo (dT) beads试剂在富集和纯化双链DNA Poly A中的应用

说明书

本发明提供了一种Oligo(dT)beads试剂在富集和纯化双链DNAPoly A中的应用方法，该方法包括：步骤S1，双链DNA Poly A的富集纯化：用与Oligo(dT)beads配套的Binding Buffer清洗Oligo(dT)beads，收集Oligo(dT)beads，加入Binding Buffer，加入含有双链DNA Poly A的溶液混合均匀并反应一段时间，收集Oligo(dT)beads；步骤S2，双链DNA Poly A的洗脱：向步骤S1最终收集到的Oligo(dT)beads中加入洗脱液，洗脱一段时间后，收集上清液，该上清液即含有富集纯化到的双链DNA Poly A。其中，Oligo(dT)beads为Oligo(dT)偶联到琼脂糖beads表面或Oligo(dT)偶联到磁珠表面。本发明采用Oligo(dT)beads与双链DNA Poly A混合孵育，实现从复杂体系中富集和纯化双链DNA Poly A的目的。本发明提供的应用方法，操作简便，富集纯化耗时短，便于通量操作。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及Oligo(dT)beads试剂在富集和纯化双链DNAPoly A中的应用。

背景技术

Oligo(dT)磁珠为磁珠表面共价偶联Oligo(dT)。磁珠尺寸均匀，在溶液中可灵活移动，这使得微珠捕获表面能够在mRNA捕获阶段与整个总RNA样品快速连续地相互作用，进而Oligo(dT)与真核生物mRNA尾部的Poly A互补配对，可用于高效地从任何总真核生物RNA或直接从动植物组织或细胞裂解物中快速分离出完整、高纯度的mRNA。

Oligo(dT)磁珠的应用主要是利用Oligo(dT)磁珠与含有Poly A的mRNA结合达到从复杂总mRNA中富集mRNA的目的(Genet Mol Biol.2023 Jan 6；45(4):e20210379；BiolProced Online.2022 Dec 27；24(1):26)。Michael Beverly(Anal Bioanal Chem.2018Feb；410(6):1667-1677)利用RNase T1处理体外转录合成的mRNA，酶切得到游离的Poly AmRNA片段，再利用Oligo(dT)磁珠从溶液中富集Poly A mRNA片段，进而利用质谱手段检测出Poly A mRNA片段中A的数量。

目前市售的Oligo(dT)磁珠，如Thermo公司的Dynabeads^TM mRNA纯化试剂盒(用于从总RNA制备液中纯化mRNA)，货号61006；NEB公司的Oligo d(T)25Magnetic Beads，货号S1419S；国产BEAVER公司的Oligo dT磁珠，货号70430-1。这些磁珠均用来富集和纯化单链的富含Poly A的mRNA。

发明内容

双链DNA Poly A，即Poly A片段为DNA，且该DNA片段含有双链，其中一条链富含Poly A，另外一条链为与Poly A互补的Poly T片段。本发明将Oligo(dT)beads用于富集和纯化双链DNA Poly A，提供了一种Oligo(dT)beads试剂在富集和纯化双链DNA Poly A中的应用方法。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供的Oligo(dT)beads试剂在富集和纯化双链DNA Poly A中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，双链DNA Poly A的富集纯化：用与Oligo(dT)beads配套的Binding Buffer清洗Oligo(dT)beads，收集Oligo(dT)beads，加入Binding Buffer，加入含有双链DNA Poly A的溶液混合均匀并反应一段时间，收集Oligo(dT)beads；步骤S2，双链DNA Poly A的洗脱：向步骤S1最终收集到的Oligo(dT)beads中加入洗脱液，洗脱一段时间后，收集上清液，该上清液即含有富集纯化到的双链DNA Poly A。