[发明专利]一种蝴蝶花高效再生的方法

权利要求书

1.一种蝴蝶花高效再生的方法，其特征在于，所述蝴蝶花高效再生的方法具体包括下述步骤：

（1）材料准备：

取蝴蝶花自交后35～40d的蒴果于4℃冰箱中保存备用，所取蒴果为胚成熟，胚乳尚未完全硬化；

（2）外植体消毒：

将步骤（1）中的蒴果，在体积比为10%的洗洁精溶液中浸泡10～15min，再在流水下冲洗30～50min，然后置于超净工作台上进行消毒处理；

（3）胚的获得：

将步骤（2）处理后的蒴果，用镊子和解剖刀沿果实纵棱切开，取出颗粒饱满的种子置于无菌滤纸上；操作人员将种子拿在手上，有萌发孔的一端朝上，用解剖针轻轻挑破萌发孔端的种皮，用手轻轻挤出白色的胚；

（4）不定芽诱导：

将步骤（3）取出的胚接种至愈伤组织诱导培养基；再将接种的胚置于25℃，黑暗条件下培养；所述愈伤组织诱导培养基为MS培养基+1.0mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+6g/L琼脂粉，pH值为5.8～5.9；

（5）增殖

在愈伤组织诱导培养基上培养3～4周后，胚膨大并长出黄色致密的愈伤组织团块；用解剖刀将愈伤组织团块切下，在愈伤组织诱导培养基上继代2～3次后转接到愈伤组织分化培养基上，在25℃，光照周期为14/10h的条件下培养；所述愈伤组织分化培养基为MS培养基+0.5mg/L TDZ+0.1mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6g/L琼脂粉，pH值为5.8～5.9；

（6）生根培养

步骤（5）中分化的小苗长至3-5 cm时，将其接种到生根培养基上，在25℃，光照周期为14/10h的条件下培养；所述愈伤组织分化培养基为MS培养基+NAA0.1 mg/L +30 g/L蔗糖+6g/L琼脂粉，pH值为5.8～5.9；

（7）移栽

将生根后的植株在组培室内打开瓶盖炼苗3-5 d，之后取出植株，洗净根部附着的培养基，移栽到灭菌的蛭石中，置于培养箱中培养，成活率达98%。

2.根据权利要求1所述的一种蝴蝶花高效再生的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述消毒处理步骤为：将蒴果置于0.1%的升汞溶液中浸泡10-15min后，用无菌水清洗4次，然后置于经高温灭菌的滤纸上备用。

3.根据权利要求1所述的一种蝴蝶花高效再生的方法，其特征在于，所述步骤(4)中愈伤组织，还能用于遗传转化体系中，作为遗传转化体系的受体。

4.根据权利要求1所述的一种蝴蝶花高效再生的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的愈伤组织诱导培养基为含0～2.0mg/L 2,4-D、0～1.0mg/L 6-BA、30 g/L蔗糖和6 g/L琼脂粉的MS培养基，且培养基溶液的pH值为5.8～5.9。

5.根据权利要求1所述的一种蝴蝶花高效再生的方法，其特征在于，该方法同样适用于蝴蝶花的杂交胚，对蝴蝶花的远缘杂交育种奠定基础。

6.根据权利要求1所述的一种蝴蝶花高效再生的方法，其特征在于，一年内可以获得10-15cm的组培苗2万余株，大大促进蝴蝶花的推广与应用。