[发明专利]水溶性壳聚糖在干细胞体外培养中的应用

说明书

本发明提供了水溶性壳聚糖在干细胞体外培养中的应用，属于细胞生物学领域。本发明发现在商用干细胞体外培养体系中添加水溶性壳聚糖，可以有效提高干细胞的活性，缩短干细胞的细胞数倍增时间。本发明还提供了一种干细胞体外培养体系添加剂和干细胞体外培养基，通过在商用培养基中添加本发明添加剂或使用本发明干细胞培养基，可以优化干细胞体外培养效果。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，具体涉及水溶性壳聚糖在干细胞体外培养中的应用。

背景技术

干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，根据不同的分化潜能可以分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞在生命科学的细胞修复、发育生物学、药物学等领域有着极为广阔的应用前景，包括：作为细胞治疗与组织器官替代治疗的种子细胞；比较胚胎干细胞和不同时空的分化细胞之间的基因表达差异，研究参与胚胎发育与分化的分子机制；作为疾病基因治疗的载体；用于药物筛选平台的建立，药理研究与新药开发。因此，干细胞的研究与体外培养对本领域而言意义重大。

水溶性壳聚糖从概念上讲是指以下几种：能溶于水的壳聚糖；能溶于水的壳聚糖盐酸盐；能溶于水的羧甲基壳聚糖；能溶于水的低分子甲壳素；能溶于水的低分子壳聚糖。常用的水溶性壳聚糖通常包括：羧化壳聚糖、壳聚糖盐类、壳聚糖硫酸酯、壳聚糖寡糖、类透明质酸壳聚糖。虽然现有技术中有部分干细胞培养基中添加有壳聚糖，但以水溶性壳聚糖作为单独的添加剂用于提高干细胞活性/缩短干细胞细胞数倍增时间的体外干细胞培养未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供水溶性壳聚糖在干细胞体外培养中的应用，通过水溶性壳聚糖的添加可以有效提高干细胞的活性，缩短干细胞的细胞数倍增时间。

本发明的目的还在于提供一种干细胞体外培养体系添加剂和一种干细胞培养基，用于干细胞的体外培养，可以有效提高干细胞的活性，缩短干细胞的细胞数倍增时间。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了水溶性壳聚糖在干细胞体外培养中的应用，所述水溶性壳聚糖直接添加于干细胞培养体系。

优选的，所述水溶性壳聚糖在干细胞培养体系中的添加量为1～5g/100mL。

优选的，所述干细胞包括脂肪间充质干细胞和人红系祖细胞来源的IPSC。

优选的，所述水溶性壳聚糖包括磺酸化壳聚糖、琥珀酰壳聚糖、氨基葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖、壳寡糖、几丁寡糖、羧甲基壳聚糖、羧甲基壳寡糖、羟丙基壳聚糖、羟丙基壳寡糖、羟乙基壳聚糖、羟乙基壳寡糖和低聚壳聚糖中的一种或几种。

优选的，所述水溶性壳聚糖选自下列任一项组合：

氨基葡萄糖与N-乙酰氨基葡萄糖按照质量比1:1～1:4组成；

壳寡糖与羧甲基壳寡糖按照质量比1:1～1:4组成；

羟丙基壳寡糖与氨基葡萄糖按照质量比1:1～1:4组成；

磺酸化壳聚糖与壳寡糖按照质量比1:1～1:9组成。

本发明还提供了一种干细胞体外培养体系添加剂，所述添加剂包括上述水溶性壳聚糖组合。

本发明还提供了一种干细胞培养基，所述培养基包括基础培养基和上述干细胞体外培养体系添加剂。

优选的，所述基础培养基包括mTeSR培养基。

本发明还提供了上述干细胞培养基的制备方法，包括以下步骤：基础培养基置于2～4℃搅拌，搅拌过程中添加水溶性壳聚糖1～5g/100mL，继续搅拌10～14h。

本发明还提供了一种干细胞体外培养方法，包括以下步骤：采用上述干细胞培养基进行传代培养。