[发明专利]一种热激蛋白基因LbHSP17.9在改变切花百合抗旱性中的应用

权利要求书

1.一种热激蛋白基因LbHSP17.9 在改变切花百合抗旱性中的应用，其特征在于，所述基因LbHSP17.9具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列能够编码SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，在百合中增强LbHSP17.9基因的表达量，以提高切花百合的抗旱性。

2.根据权利要求1所述的热激蛋白基因LbHSP17.9在改变切花百合抗旱性中的应用，其特征在于：具体步骤如下：

利用 LbHSP17.9基因序列设计引物LbHSP17.9-F与LbHSP17.9-R和LbHSP17.9-F’，以黄天霸cDNA为模板进行PCR扩增LbHSP17.9基因，获得目的片段LbHSP17.9基因片段；

PC1300S-GFP载体用KpnI与BamHI双酶切处理并回收，与步骤（1）的PCR扩增产物LbHSP17.9基因片段进行重组得到重组产物，将重组产物转化到大肠杆菌上，然后涂抗性平板，挑选克隆子及摇菌，然后将引物A580-seqR与LbHSP17.9-F’菌落通过PCR技术进行阳性克隆的验证，然后进行测序验证得到表达OE-LbHSP17.9的细菌培养物；

将表达OE-LbHSP17.9的细菌培养物重悬在浸润缓冲液中，然后在22℃无光条件下放置5小时，得到侵染液；

（4）将侵染液通过真空侵染转化至切花百合中，以提高切花百合的抗旱性。

3.根据权利要求2所述的热激蛋白基因LbHSP17.9在改变切花百合抗旱性中的应用，其特征在于：步骤（1）中设计引物是利用软件Primer Premier 5进行设计。

4.根据权利要求2所述的热激蛋白基因LbHSP17.9在改变切花百合抗旱性中的应用，其特征在于：步骤（1）中引物具体基因序列如下：

引物：LbHSP17.9-F：GCTTTCGCGAGCTCGGTACCATGTCGATCATCCGCAGGAGCAACGTCT

LbHSP17.9-R: CGCCCTTGCTCACCATGGATCCGCCAGAGATATCGATGGATTTG

LbHSP17.9-F’: CTAGAAGGCCTCCATGGGGATCCCTAACACCCGCATCGACTGG。

5.根据权利要求2所述的热激蛋白基因LbHSP17.9在改变切花百合抗旱性中的应用，其特征在于：步骤（3）的浸润缓冲液分为两种：10mM MES与10mM MgCl混合后调pH5.6；200M乙酰丁香酮溶液。

6.根据权利要求2所述的热激蛋白基因LbHSP17.9在改变切花百合抗旱性中的应用，其特征在于：引物A580-seqR是根据PC1300S-GFP载体骨架设计的，基因序列为AGAAGATGGTGCGCTCCTG。