[发明专利]一种肺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种肺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用，属于生物医药领域。所述肺癌免疫治疗耐药细胞系已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月8日，保藏编号为CCTCCNO:C202307。通过细胞功能学实验，发现该耐药细胞系体外增殖、迁移能力不变；小鼠荷瘤实验发现，该耐药细胞系体内增殖能力增强且对PD‑1抗体治疗的耐受性显著增加，可用于深入研究肺癌PD‑1抗体治疗耐药的分子机制及开发相关抗肿瘤药物，为筛选肺癌PD‑1抗体治疗耐药的分子标志物、设计和评估新型抗肿瘤药物以及开发新的肿瘤治疗方案等提供新材料。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种肺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

原发性肺癌是我国最常见的恶性肿瘤。其中非小细胞肺癌(non small cell lungcancer，NSCLC)约占80％～85％，其余为小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)。肺癌在中国的发病率和死亡率均位于恶性肿瘤中的第1位。由于早期肺癌多无明显症状，临床上多数患者出现症状就诊时已属晚期，而晚期肺癌患者整体5年生存率不高。AJCC第8版肿瘤分期手册报道的对94703例NSCLC患者的统计分析结果显示，Ⅳ期肺癌患者的5年生存率仅为不到5％，中位生存期只有7个月。

晚期肺癌的治疗目前以放疗、化疗为主。晚期NSCLC对于驱动基因阴性的患者，含铂的两药联合方案是标准的一线化疗方案。近年，以免疫检查点抑制剂(如PD-1单抗等)为代表的免疫治疗已被证实可改善肺癌患者的生存率。2022版原发性肺癌诊疗指南中建议晚期肺癌可行卡瑞利珠(PD-1单抗)，帕博利珠(PD-1单抗)、替雷利珠(PD-1单抗)，信迪利(PD-1单抗)或阿替利珠(PD-L1单抗)联合培美曲塞为基础的含铂两药化疗。

虽然免疫治疗近些年来发展迅速，但我们不得不面对的问题是：1.免疫治疗的响应率不高。仅少数肿瘤具备高响应率：如霍奇金淋巴瘤(87％)，黑色素瘤(40％-70％),而NSCLC响应率却极低(仅20％)。2.部分患者用药后不久发生耐药，甚至是在一些初始反应良好的患者通过获得性耐药导致肿瘤复发。总体而言，已经明确PD-1单抗对晚期肺癌具有确切的治疗效果，但其治疗效果仍然受耐药问题的限制。

目前针对PD-1抗体的耐药研究主要涉及的内在机制主要为：MAPK通路、PI3K信号通路、WNT/β-catenin信号通路、IFN-γ信号通路等。随着免疫治疗耐药的发生，研究更为有效的药物靶点就显得尤为重要。而目前尚无对PD-1抗体耐药的肺癌细胞株。因此，构建PD-1抗体耐药的肺癌细胞株显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种肺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题。本发明获得的耐药细胞系具有稳定的PD-1抗体耐药性，体外增殖、迁移能力不变，具有较高的科研和临床应用价值。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种肺癌免疫治疗耐药细胞系CMT167-R，所述耐药细胞系CMT167-R已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月8日，保藏编号为CCTCC NO:C202307。

进一步地，所述耐药细胞系CMT167-R的构建方法包括以下步骤：

(1)利用肺癌细胞系CMT167构建小鼠皮下瘤模型，给予免疫检查点PD-1抗体治疗，筛选治疗后体积最大的肿瘤；

(2)无菌条件下分离筛选得到的体积最大的肿瘤组织，剪碎后在培养基中培养并传代，获得肿瘤原代细胞，利用所述肿瘤原代细胞继续构建小鼠皮下瘤模型，给予免疫检查点PD-1抗体治疗，筛选治疗后体积最大的肿瘤；

(3)重复步骤(2)直至免疫检查点PD-1抗体治疗组的肿瘤体积与对照组相比无显著差异，筛选免疫检查点PD-1抗体治疗组体积最大的肿瘤；