[发明专利]一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法

权利要求书

1.一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：包括以下步骤：

S1、将两种及以上的颗粒蛋白组装亚基及其融合蛋白基因分别插入同一个质粒的两个及以上阅读框中，各个阅读框之间含有独立的核糖体结合位点(RBS)，各阅读框内的目的基因序列的上游(5’端)含有独立的启动密码子序列(ATG)，下游(3’端)含有终止密码子(TAG/TGA/TAA)，各目的基因以非融合的形式进行共表达；

S2、将两种及以上的颗粒蛋白组装亚基及其融合蛋白基因所属的阅读框，使用单一的启动子控制启动多个目的基因的等量转录与恒定比例表达；

S3、根据步骤S2，使所述颗粒蛋白在原核表达体系中在胞内以可溶的形式高表达，实现多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并自行组装。

2.如权利要求1所述的一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：所述的颗粒蛋白具有球形或类球形外观，且具有穹顶状中空结构，且具有多个单一蛋白亚基或多种蛋白亚基共同组装而成的蛋白复合体；两种及以上的所述颗粒蛋白亚基及突变体、融合蛋白在原核表达体系中能够表达并组装成为蛋白颗粒，所述颗粒蛋白为全重链铁蛋白、全轻链铁蛋白、重链轻链杂聚铁蛋白、Qβ噬菌体衣壳蛋白颗粒、乙肝病毒衣壳蛋白颗粒或人乳头瘤病毒。

3.如权利要求1所述的一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：两种及以上的所述颗粒蛋白亚基及其突变体、融合体在不改变颗粒蛋白固有组装方式的前提下，对其一级结构氨基酸序列中的任意位点进行一个或数个氨基酸的替换、缺失或插入的突变体，或在其N端或者C端插入一段氨基酸序列的融合蛋白，即为颗粒蛋白亚基衍生物或颗粒蛋白组装亚基同源等同体。

4.如权利要求1所述的一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：所述的启动子为在原核表达体系中通过添加诱导剂或改变其它条件可促使启动子下游至终止子间的基因序列高效转录，且所述启动子为大肠杆菌体系启动子，所述大肠杆菌体系启动子为乳糖启动子、色氨酸启动子、T7启动子、λ噬菌体转录启动子或PL/PR启动子。

5.如权利要求1所述的一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：所述颗粒蛋白亚基及其突变体、融合体的原核表达体系优选大肠杆菌，且其具备鲜明的原核表达体系特征，所述大肠杆菌的宿主菌为BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、JM109或Rosetta(DE3)。

6.如权利要求1所述的一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：所述的自行组装为颗粒蛋白亚基及其组装同源等同体在宿主细菌胞内被合成后，即可组装为颗粒蛋白。

7.如权利要求1所述的一种原核体系中单启动子控制多个颗粒蛋白亚基组装同源等同体在胞内恒定比例表达并共自组装的方法，其特征是：所述的质粒可在原核表达体系中自我复制、扩增并随着宿主细菌分裂传代保留，所述质粒为pET系列质粒或pBV系列质粒；所述的代表性质粒是在一种具代表性的商品化质粒pACYCDuet-1的基础上进行重构并删除其中一个T7启动子元件后的新功能质粒，即代表性重构的表达载体dT7-pACYCDuet-1，其基因序列如SEQ ID NO：2所示，其代表性的特征是具有单一启动子控制多个阅读框基因转录；所述质粒pACYCDuet-1的基因序列如SEQ ID NO：1所示。