[发明专利]自身免疫性水疱病PBMCs直接免疫荧光诊断试剂盒

说明书

本发明属于诊断试剂盒技术领域，公开了一种自身免疫性水疱病PBMCs直接免疫荧光诊断试剂盒。组成包括经正电荷处理的九孔板、封闭液、FITC标记的IgG抗体、10×PBS。使用容易获得且均一性好的PBMCs替代患者的皮肤/黏膜组织进行直接免疫荧光染色，来检测PBMCs结合的自身抗体，从而用于自身免疫性水疱病的诊断；因为PBMCs可以多次获得，本方法不仅可以用于诊断，还可以用于患者治疗效果的监测。

技术领域

本发明属于诊断试剂盒技术领域，具体涉及一种自身免疫性水疱病PBMCs直接免疫荧光诊断试剂盒。

背景技术

自身免疫性水疱病是一类皮肤和黏膜表现为水疱、红斑、皮疹、糜烂等损伤的自身免疫性疾病，多种表皮细胞间和表皮基底膜蛋白的自身抗体是该类疾病的致病因素。该类疾病单纯依靠临床表现无法诊断，实验室检测到组织结合和/或循环的自身抗体，才能进行诊断。其中组织结合的自身抗体的检测依然是公认的诊断金标准。

自身免疫性水疱病主要分为两大类，天疱疮和类天疱疮。天疱疮的患者体内存在desmogelin 1(Dsg1)、Dsg3等表皮细胞间蛋白的自身抗体，组织的直接免疫荧光表现为表皮细胞间的染色阳性。类天疱疮的患者体内存在BP180、laminin gamma 1、type VIIcollagen、laminin 332等自身抗体，组织的直接免疫荧光多表现为表皮基底膜的染色阳性(线性沉积)。

综上所述，对所有患者进行组织结合的直接免疫荧光实验，检测结合的自身抗体，并提高检测敏感性，是当务之急。

使用患者活检组织切片的直接免疫荧光实验检测自身免疫性水疱病的组织结合的自身抗体依然是目前诊断自身免疫性水疱病的金标准。然而，该方法存在两个主要的问题：(1)不是所有的患者都适合进行皮肤组织和黏膜组织取材，例如眼黏膜类天疱疮患者通常主要为眼黏膜损伤，直接眼部组织取材进行传统的组织荧光病理检查是多数患者无法接受的；(2)因为组织取材的位置或者取材后的保存和切片过程的问题等各种原因造成的假阴性结果非常常见。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种自身免疫性水疱病PBMCs直接免疫荧光诊断试剂盒，该试剂盒只需要抽取外周血，不需要切取皮肤或者黏膜组织，几乎适用于所有自身免疫性水疱病的患者；PMBCs相对比较均一，不会因为组织取材的位置等原因影响检测结果。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：一种自身免疫性水疱病PBMCs直接免疫荧光诊断试剂盒，组成包括：

1.经正电荷处理的九孔板；

2.封闭液；

3.FITC标记的IgG抗体；

4.10×PBS。

其中，所述经正电荷处理的九孔板中2个孔为阳性对照，1个孔为阴性对照，6个孔用于检测患者PBMCs。

所述封闭液为2.5％山羊血清，含量为4ml。

所述FITC标记的IgG抗体具体为FITC标记的兔抗人IgG抗体，含量为4ml。

所述10×PBS含量为10ml。

进一步的，所述经正电荷处理的九孔板的制备方法为：将九孔板中的九个孔命名为A、B、C、1、2、3、4、5、6，取已分离的一个大疱性类天疱疮患者、一个寻常型天疱疮患者和一个正常人的PBMCs分别加入到A、B、C孔中，每孔加入50μl PBMCs，使用枪头涂布均匀至孔底，孔1-6为空白；将九孔板室温下静置3h以上，直至孔中液体完全挥发；然后将九孔板-20℃条件下保存。