[发明专利]PdeMYB194基因在调控植物叶色叶形及抗旱性中的应用

权利要求书

1.PdeMYB194基因的应用，用于调节植物的性状，PdeMYB194基因核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述的植物选自：杨树；所述的植物性状是：植物叶色、植物叶片大小、叶片的红度值、叶片的黄度值、叶宽、叶长、叶柄长、叶片内缘周长、叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素含量、类胡萝卜素、类胡萝卜素与叶绿素含量比、叶片类黄酮含量、花色苷含量、花青素含量、原花青素含量、总酚含量、油菜素内酯含量、淀粉含量、叶片厚度、抗旱性、干旱胁迫下植株的苗高和地径的生长、干旱胁迫下植株的生物量积累、干旱胁迫下植株的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO₂浓度/环境CO₂浓度(Ci/Ca)、瞬时水分利用效率(R_WUEi)、干旱胁迫下植株的叶绿素荧光、干旱胁迫下植株的叶绿素相对含量、干旱胁迫下植株的叶片相对电导率、干旱胁迫下株系叶片与根系的丙二醛(MDA)含量、干旱胁迫下叶片的含水量，PdeMYB194基因用于调节以上一种或几种植物性状。

2.如权利要求1所述的应用，促进杨树中PdeMYB194基因的过表达，从而调节杨树叶片变为暗绿色；调节杨树叶片变小；调节叶宽、叶长、叶柄长、叶片内缘周长变小，调节叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素含量降低，调节类胡萝卜素含量的增高，调节类胡萝卜素与叶绿素含量比的增高，调节类黄酮含量、花色素苷含量、花青素含量、原花青素含量、总酚含量、油菜素内酯含量、淀粉含量降低，调节杨树叶片厚度增加，增强杨树的抗旱性。

3.如权利要求2所述的应用，在实施应用过程中，使用携带PdeMYB194超表达载体的农杆菌转化南林895杨的幼嫩叶片，通过诱导长芽、生根，使幼嫩叶片长成幼苗，此幼苗为阳性苗。

4.一种构建权利要求3种阳性苗的构建方法，包括如下步骤：

(1)采用CTAB法从杨树叶片中提取mRNA，反转录成cDNA；

(2)以cDNA为模板，设计引物PdeMYB194-OE-F/PdeMYB194-OE-R，克隆PdeMYB194基因CDS全长666bp；

(3)采用gateway clone方法，将PdeMYB194基因全长克隆至超表达载体pKGW-RR-MGW；

(4)将携带目标基因PdeMYB194的超表达载体，用电击法转化至根癌农杆菌EHA105中，用于南林895杨侵染；

(5)采用根癌农杆菌EHA105介导的叶盘转化法进行南林895杨的遗传转化；通过叶片侵染、共培养、愈伤组织诱导、芽诱导、芽伸长、生根培养步骤，获得转基因抗性苗；

(6)采用PCR方法，通过4对引物鉴定转基因阳性苗，分别为：DsRed-F1/AtUBQ10-R1、DsRed-F3/DsRed-R2、Attb1/Attb2、PdeMYB194-F5/AtUBQ10-R5；

(7)采用RT-PCR和qRT-PCR方法，设计引物PdeMYB194-OE-F1/PdeMYB194-OE-R1鉴定目标基因PdeMYB194在阳性苗的叶片与根系中相对于野生型南林895杨的相对表达量。