[发明专利]PRiME HLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法

权利要求书

1.PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将待测样品与乙腈-甲醇溶液混合，依次进行振荡提取、离心，得上清液；

(2)将上述所得上清液转移到PRiMEHLB固相萃取柱，控制流速为1～2mL/min，收集滤液；

(3)将上述所得滤液用甲酸水溶液稀释定容，将定容后的滤液过0.2～0.8μm滤膜，得供试品溶液；

(4)分别将不同种类的β-内酰胺类药物标准品用乙腈-水溶液溶解并定容，得标准品溶液；

(5)分别对上述所得供试品溶液和标准品溶液进行液相色谱-串联质谱仪测定，若供试品溶液的参考保留时间与标准品溶液的参考保留时间偏差在±2.5％之间；且供试品溶液中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准品溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，当相对离子丰度＞50％时，相对偏差在±20％之间，或当相对离子丰度为20～50％时，相对偏差在±25％之间，或当相对离子丰度为10～20％时，相对偏差在±30％之间，或当相对离子丰度≤10％时，相对偏差在±50％之间，则说明供试品溶液中存在对应的β-内酰胺类待测物，可用于进行下一步测定，否则说明供试品溶液中不存在对应的β-内酰胺类待测物；

(6)按照公式X＝(A×V₁×V₃)/(A_S×V₂×m×1000)×C计算待测样品中β-内酰胺类待测物的含量，其中，X为待测样品中待测物的含量，单位为mg/kg，A为供试品溶液中待测物的峰面积，A_S为标准品溶液中待测物的峰面积，C为标准品溶液中待测物的质量浓度，单位为ng/mL，V₁为步骤(1)中提取溶剂总体积，单位为mL，V₂为步骤(3)中用于稀释滤液的体积，单位为mL，V₃为步骤(3)中滤液定容后的体积，单位为mL，m为待测样品的质量，单位为g。

2.根据权利要求1所述的PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测样品与乙腈-甲醇溶液的比例为0.5～1.5g:20mL，所述乙腈-甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为1～2:1～2。

3.根据权利要求1或2所述的PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(1)中所述振荡提取的频率为110～130r/min，所述振荡提取的时间为25～35min，所述离心的转速为3500～4500r/min，所述离心的时间为3～7min。

4.根据权利要求3所述的PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PRiMEHLB固相萃取柱的填料为N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯苯共聚物。

5.根据权利要求4所述的PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(3)中所述甲酸水溶液的体积浓度为0.05～0.15％，所述滤液与定容后的滤液的体积比为1:1.5～2.5。

6.根据权利要求5所述的PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(4)中所述β-内酰胺类药物标准品与乙腈-水溶液的比例为1～2mg:1～2mL，所述乙腈-水溶液中乙腈与水的体积比为1～2:1～2。

7.根据权利要求6所述的PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(5)中所述供试品溶液和标准品溶液中的母离子个数独立为＞1，子离子个数独立为＞2。