[发明专利]一种C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗及其制备方法与应用。本发明采用含TP5‑BP5‑BS免疫增强序列融合的C型鸡传染性鼻炎外膜蛋白HMTp210基因的Region 2(简写为TP5‑BP5‑BS‑C‑R2)为免疫原制备亚单位疫苗。按本发明方法制备的C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗具有较高的安全性，克服了全菌灭活疫苗容易引起注射部位肿胀等副反应，而且能够快速诱导免疫动物产生高水平的中和抗体，实现C型鸡传染性鼻炎的高效免疫保护，免疫效果优于不含免疫增强序列的C型鼻炎亚单位疫苗和全菌灭活疫苗，且该亚单位疫苗的制备过程简单，成本低廉，易于大规模生产。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

鸡传染性鼻炎(Avian infectious coryza)是由副鸡禽杆菌(Avibacteriumparagallinarum，Apg)感染引起的一种鸡急性上呼吸道传染病。目前该病已广泛流行于国内各养殖区域，特别是对蛋鸡的生产性能造成很大的影响。该病主要造成育成鸡生长不良和产蛋鸡产蛋明显下降，并可使肉鸡淘汰率明显升高，造成很大的经济损失。

副鸡禽杆菌为巴氏杆菌科的一种短小革兰氏阴性杆菌，Page等人将副鸡禽杆菌分为A、B和C三种血清型，研究表明A、B、C三个血清型的副鸡禽杆菌对鸡均有不同程度的致病力。近年来随着鸡传染性鼻炎等细菌病发病率的增加，临床上大量药物的使用等因素的影响，鸡传染性鼻炎菌株耐药性普遍增强，药物敏感度下降致使治疗效果亦受到了较大影响。蛋鸡产蛋期禁用磺胺类药物，因此疫苗防控逐渐成为鸡传染性鼻炎防控的首选，市场对传染性鼻炎疫苗尤其是高品质疫苗的需求逐渐增加。目前市场上有二价疫苗、三价疫苗等多种防控鼻炎的疫苗产品，尤其是A、B、C全菌三价疫苗能够对所有的鼻炎血清型提供保护，因而市场容量较大。由于副鸡禽杆菌属于苛生菌，培养成本较高；而且由于全菌灭活疫苗中含有大量的菌体蛋白、内毒素、其他毒性物质以及附加物等因素，易造成较为严重的副反应，在接种部位还会形成局灶性坏死斑。加之目前市售鸡传染性鼻炎灭活疫苗的抗原均是细菌抗原，细菌抗原为颗粒性抗原，乳化不均一，而且在疫苗运输和保存过程中易破乳分层。为了开发更为安全有效的疫苗，有学者研究了通过遗传重组技术制备重组疫苗的可行性。例如，Ryuichi Sakamoto等人克隆表达了A型和C型副鸡禽杆菌的HMTp210-R2，免疫鸡群后获得了良好的保护效果。

法氏囊是禽类特有的中枢淋巴器官,是B细胞发育的最早发生场所。囊素三肽是法氏囊组织中提取的第一个活性肽，是法氏囊的重要活性组成成分，能提高机体免疫系统功能，而且对哺乳动物也具有重要的免疫学活性及生理作用。以往的研究主要集中在囊素的研究，近年来，随着质谱技术在蛋白质分离鉴定方面的广泛应用，法氏囊组织中陆续分离鉴定出多条生物活性肽，在免疫学活性功能及作用机制方面均有重大突破。部分法氏囊活性肽除具有免疫调节功能，有些还具有抗肿瘤潜能。到目前为止，未见有含TP5-BP5-BS免疫增强序列融合的C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗相关报道，目前市售鸡传染性鼻炎灭活疫苗的免疫保护率一般在70％左右，在临床实际应用过程中免疫后不保护发病现象时有发生。

发明内容

本发明提供一种C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗及其制备方法与应用，用以解决现有技术中市售鸡传染性鼻炎灭活疫苗的免疫保护率低的缺陷。本发明将多种免疫增强序列与C型鸡鸡传染性鼻炎HMTp210基因的Region 2融合表达，显著提高了C型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗的保护效率。

本发明提供一种保护性抗原，所述保护性抗原的氨基酸序列如SEQ IN NO.1所示。本发明所述保护性抗原为含TP5-BP5-BS免疫增强序列融合的C型鸡传染性鼻炎HMTp210基因的Region 2，利用本发明所述保护性抗原制备的亚单位疫苗具有安全性高、免疫效力高的优势，在免疫动物后，能够快速诱导高水平的中和抗体的产生，实现C型鸡传染性鼻炎的高效免疫保护，免疫效果优于全菌灭活疫苗和未含免疫增强序列的亚单位疫苗。

本发明还提供一种核酸，所述核酸用于编码所述保护性抗原，所述核酸的核苷酸序列为如下任一种：