[发明专利]一种层出镰孢菌（Fusarium proliferatum）APF-1菌株及其应用和分离方法

说明书

本发明公开了一种层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF‑1菌株及其应用和分离方法，所述层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF‑1保藏编号为CGMCC 40442，保藏于中国微生菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其可用于去除杂草喜旱莲子草。所述层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF‑1的制备方法包括步骤：(1)从田间采集发病喜旱莲子草样本；(2)病样的表面消毒；(3)菌落的培养；(4)菌丝的纯化(5)菌株的单孢分离。本发明提供的层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF‑1通过从田间发病的喜旱莲子草植株上直接分离获得，其对喜旱莲子草的生物防治效果显著。

技术领域

本发明属于微生物和除草剂技术领域,具体涉及一种层出镰孢菌(Fusariumproliferatum)APF-1菌株及其应用和分离方法。

背景技术

喜旱莲子草是一种世界性入侵杂草，其根系发达,地上部分繁茂,在农田中生长与作物争光、水、肥以及空间,造成作物减产和品质下降，危害严重。世界上对该杂草的防除进行了大量研究，化学除草剂如草甘磷、敌草睛、百垄通、甲黄隆等已被广泛地应用。然而化学药剂易污染环境，并使植物产生耐药性，而生物防治得到越来越多人的追捧。

目前利用喜旱莲子草的病原菌对其进行控制取得了一定的成效，如假隔链格孢菌(Nimbya alternantherae(HolcombAntonop.)E.G.SimmonsAlcorn)、蕉斑镰刀菌(Fusarium stoveri C.Booth)、异孢镰孢(Fusarium heterosporium Nees)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Sch1.)等。然而，目前这些生防菌株的筛选样本量偏小，应用范围较窄。

发明内容

针对背景技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种可致喜旱莲子草黄化腐烂的病原菌层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF-1菌株及其应用和制备方法，所述层出镰孢菌Fusarium proliferatum APF-1菌株的保藏编号为CGMCC No.40442，其可以更有效的对喜旱莲子草进行生物防治。

本发明第一方面，提供一种层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF-1，保藏编号为CGMCC No.40442，2022年12月14日保藏于中国微生菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

本发明第二方面，提供保藏编号为CGMCC No.40442的层出镰孢菌(Fusariumproliferatum)APF-1在生物除草剂中的应用。

优选的，所述除草剂的作用对象包括喜旱莲子草，可致作物中生长的喜旱莲子草黄化腐烂。

本发明第三方面，提供层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)APF-1菌株的分离方法，包括以下步骤：

(1)发病样本采集：从喜旱莲子草生长田间采集发病样本，备用；

(2)病样的表面消毒：将发病样本的病叶剪成约5mm×5mm的小块，经75％酒精消毒4s、2％次氯酸钠5min后，用无菌水冲洗3次，置于无菌干燥滤纸上自然晾干；

(3)菌落的培养：将小块置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板上，28℃黑暗培养48h；

(4)菌丝的纯化：挑取小块上生长的菌丝末端一小块移入新鲜PDA培养基上培养，获得纯培养物；

(5)单孢分离：在上述培养3d的纯培养物中加入10mL无菌水，用无菌涂布器将孢子洗下，无菌滤布过滤，无菌水调节孢子浓度为1×10⁵个/mL孢子悬液，取100μL涂布于PDA平板上，培养24h，可见单菌落，将单菌落菌丝末端一小块移入新鲜PDA培养基上培养获得单孢分离物APF-1菌株。