[发明专利]一种检测甘胆酸的免疫学试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种检测甘胆酸的免疫学试剂盒及检测方法，属于免疫检测技术领域。本发明以甘胆酸为原料，利用抗原抗体特异性结合的原理，制备一种基于利用免疫学方法，以胶体金为示踪物快速检测样本中甘胆酸有效含量的方法与试剂盒，具体包括直接反应法和竞争结合法。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种检测甘胆酸的免疫学试剂盒及检测方法。

背景技术

甘胆酸(Cholyglycine，简称：CG)，其中文别名为：N-(3,7,12-三羟基-24-羰基胆烷-24-基)-甘氨酸，具有如图4所示的分子结构。

甘胆酸本质是甘氨酸与胆酸结合而形成的一种结合型胆酸，在肝细胞内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。当肝细胞受损时，肝细胞摄取甘胆酸能力下降，致使血中甘胆酸含量增高。胆汁淤滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的甘胆酸含量增高，也使血甘胆酸含量增高。因此，测定血清甘胆酸是评价肝细胞功能及其肝胆系统循环功能的敏感指标之一。也正因为如此，测定甘胆酸是作为监测各种类型肝炎、肝硬化及肝癌等肝脏系统病变的指标，同时也是作为诊断妊娠期胆汁淤积症的最灵敏指标。但是目前甘胆酸的检测存在检测灵敏度低以及实际稳定性差等缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测甘胆酸的免疫学试剂盒及检测方法，根据免疫学原理，快速定性和/或定量检测样品中甘胆酸含量，检测灵敏度高且试剂稳定性好。

本发明提供了一种检测甘胆酸的免疫学试剂盒，包括：标记在胶体金表面的甘胆酸或抗甘胆酸抗体，和梯度浓度的甘胆酸溶液。

优选的，所述抗甘胆酸抗体为与甘胆酸或甘胆酸衍生物中特定甘胆酸分子结构特异性结合的免疫球蛋白。

优选的，所述抗甘胆酸抗体的制备方法，包括以甘胆酸或甘胆酸衍生物为抗原，通过免疫学方法制备得到。

优选的，免疫球蛋白为单克隆抗体或多克隆抗体。

优选的，所述免疫球蛋白的种类包括IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。

优选的，所述胶体金的粒径为30～90nm。

本发明还提供了一种非诊断目的检测样本中甘胆酸的的竞争性方法，包括以下步骤：利用已知浓度的甘胆酸溶液做校准品，与标记在胶体金颗粒表面的甘胆酸和抗甘胆酸抗体构建校准体系，根据胶体金示踪后的抗原-抗体复合物含量与校准品中的甘胆酸含量测制校准曲线；

将样品与标记在胶体金颗粒表面的甘胆酸和抗甘胆酸抗体构建竞争体系，将检测得到的胶体金示踪后的抗原-抗体复合物含量带入所述校准曲线，得样本中甘胆酸含量。

本发明还提供了一种非诊断目的检测样本中甘胆酸的的直接反应方法，包括以下步骤：利用已知浓度的甘胆酸溶液做校准品，与标记在胶体金颗粒表面的抗甘胆酸抗体构建校准体系，基于胶体金比色方法示踪分析抗原-抗体复合物含量，根据抗原-抗体复合物含量与校准品中的甘胆酸含量构建校准曲线；

将样品与标记在胶体金颗粒表面的抗甘胆酸抗体构建直接反应体系，将基于胶体金比色方法示踪分析得到的抗原-抗体复合物含量带入所述校准曲线，得样本中甘胆酸含量。

有益效果：本发明提供了一种基于免疫学原理，以胶体金为示踪物快速检测甘胆酸的试剂盒，并以此形成了以梯度甘胆酸溶液为校准品，含有甘胆酸不同浓度的质控品，检测试剂及其配套耗材的试剂盒，便于甘胆酸的快速检测。在本发明中，以甘胆酸为原料，利用生物技术原理制备抗甘胆酸抗体，以胶体金为示踪物，可通过两种方法检测样本中甘胆酸的含量：

(1)直接反应法