[发明专利]一种牛传染性鼻气管炎灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明通过优化牛传染性鼻气管炎灭活疫苗抗原组分，制备出一种新的牛传染性鼻气管炎灭活疫苗，免疫牛后可产生高水平的中和抗体；经过悬浮培养工艺提升和灭活剂、佐剂筛选与纯化工艺提升，提高了疫苗的安全性。安全、效力试验结果显示：使用本发明的灭活疫苗免疫牛后无不良反应，且均产生了高水平的中和抗体。结果说明利用本发明能够提高牛传染性鼻气管炎灭活疫苗的免疫效果。

技术领域

本发明涉及一种牛传染性鼻气管炎灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis,IBR)由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)引起，临床症状主要为呼吸困难、流鼻液、上呼吸道及气管黏膜发炎等，也可引起生殖系统症状。除引起相应临床症状外，牛传染性鼻气管炎还可导致奶牛产奶量下降、流产率升高与肉牛增重减缓，给牧场造成极大的经济损失。该病是免疫抑制病，单独感染时危害相对较低，若发生与其他病毒病、细菌病的混合感染，危害性将大幅提高。防控该病最有效的方法为免疫疫苗。目前牧场使用的牛传染性鼻气管炎疫苗主要是灭活疫苗，免疫效果监测显示，免疫灭活疫苗后牛的中和抗体效价偏低且存在一定的过敏反应。因此，有必要提供一种安全有效的牛传染性鼻气管炎疫苗用于预防牛传染性鼻气管炎病的发生。

发明内容

本发明的目的在于将MDBK细胞悬浮培养获得的牛传染性鼻气管炎病毒J1株抗原与CHO细胞培养获得的牛传染性鼻气管炎病毒J1株gB蛋白经灭活、纯化后按一定比例混合，配以适当佐剂配制灭活疫苗，提高牛免疫后的中和抗体水平与疫苗安全性，进而提高预防牛传染性鼻气管炎病发生的成功率，确实免疫效果。

本发明的技术方案

1.一种牛传染性鼻气管炎灭活疫苗，其特征是，疫苗的有效成分包括经灭活、纯化的J1株牛传染性鼻气管炎病毒和经纯化的J1株牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白。

2.本发明所述的牛传染性鼻气管炎灭活疫苗，其特征在于该疫苗制备步骤包括：

(1)利用pcDNA3.1(-)载体构建表达牛传染性鼻气管炎病毒J1株gB蛋白的真核表达载体pcDNA3.1-gB；

(2)半成品制备：

1)J1株牛传染性鼻气管炎病毒液，由MDBK悬浮细胞培养后经BEI灭活，并利用膜包进行纯化；

2)J1株牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白，由真核表达载体pcDNA3.1-gB转染CHO细胞后利用镍柱亲和层析进行纯化；

(3)配苗：将灭活、纯化后的J1株牛传染性鼻气管炎病毒液和纯化后的牛传染性鼻气管炎病毒J1株gB蛋白按一定比例混合，加入双相佐剂乳化配苗。

本发明使用的生物反应器为APPLIKON公司30L～2000L细胞生物反应器。

本发明有益效果

本发明通过优化牛传染性鼻气管炎灭活疫苗抗原组分，制备出一种新的牛传染性鼻气管炎灭活疫苗，免疫牛后可产生高水平的中和抗体；经过悬浮培养工艺提升和灭活剂、佐剂筛选与纯化工艺提升，提高了疫苗的安全性。安全、效力试验结果显示：使用本发明的灭活疫苗免疫牛后无不良反应，且均产生了高水平的中和抗体。结果说明利用本发明能够提高牛传染性鼻气管炎灭活疫苗的免疫效果。

本发明涉及的生物材料资源信息

本发明的病毒毒株：牛传染性鼻气管炎病毒J1株为本发明人在我国国内分离获得，该毒株已于2017年03月15日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.13786。

本发明具体实施方式