[发明专利]一种复合水凝胶在促进细胞成球培养中的应用在审
| 申请号： | 202310030299.4 | 申请日： | 2023-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN116083363A | 公开（公告）日： | 2023-05-09 |
| 发明（设计）人： | 相佳佳;郭云舟;陈玉平;邵世群 | 申请（专利权）人： | 浙江大学杭州国际科创中心 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12N5/077;C12N5/0786;C12N5/071;C08J3/075;C08J3/24;C08L29/04;C08L5/04 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龙 |
| 地址： | 311200 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 复合 凝胶 促进 细胞 培养 中的 应用 | ||
1.一种复合水凝胶在促进细胞成球培养中的应用，其特征在于，所述复合水凝胶为聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶，细胞成球培养时，将所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶垫在培养液的底部，细胞培养在所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶的上方，
所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶的制备方法包括以下步骤：
(1)分别配置聚乙烯醇溶液、海藻酸钠溶液和氯化钙溶液；
(2)将聚乙烯醇溶液和海藻酸钠溶液混合获得聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液；
(3)向聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液中加入交联剂氯化钙溶液，交联获得聚乙烯醇和海藻酸钠复合的水凝胶，
其中，聚乙烯醇溶液的浓度为10wt％，海藻酸钠溶液的浓度为4wt％，聚乙烯醇溶液和海藻酸钠溶液按体积比5∶1混合。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，氯化钙溶液的浓度为0.5M，氯化钙溶液与聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液的体积比为1∶1；
加入氯化钙溶液进行交联之前，先去除聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液中的气泡；
交联过程为静置交联至少12小时；
交联完成后将所得聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶浸泡超纯水以除去游离的钙离子。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，细胞培养前先将所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶灭菌处理。
4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，成球培养的细胞为以下一种：
(1)肿瘤细胞；
(2)肿瘤细胞与肿瘤组织周边细胞的混合；
(3)免疫细胞。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，肿瘤组织周边细胞为以下至少一种：成纤维细胞、巨噬细胞。
6.一种细胞成球培养方法，其特征在于，细胞成球培养时，将聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶垫在培养液的底部，细胞培养在所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶的上方，
所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶的制备方法包括以下步骤：
(1)分别配置聚乙烯醇溶液、海藻酸钠溶液和氯化钙溶液；
(2)将聚乙烯醇溶液和海藻酸钠溶液混合获得聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液；
(3)向聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液中加入交联剂氯化钙溶液，交联获得聚乙烯醇和海藻酸钠复合的超大孔水凝胶，
其中，聚乙烯醇溶液的浓度为10wt％，海藻酸钠溶液的浓度为4wt％，聚乙烯醇溶液和海藻酸钠溶液按体积比5∶1混合。
7.根据权利要求6所述细胞成球培养方法，其特征在于，氯化钙溶液的浓度为0.5M，氯化钙溶液与聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液的体积比为1∶1；
加入氯化钙溶液进行交联之前，先去除聚乙烯醇/海藻酸钠混合溶液中的气泡；
交联过程为静置交联至少12小时；
交联完成后将所得聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶浸泡超纯水以除去游离的钙离子。
8.根据权利要求6所述细胞成球培养方法，其特征在于，细胞培养前先将所述聚乙烯醇/海藻酸钠复合水凝胶灭菌处理。
9.根据权利要求6所述细胞成球培养方法，其特征在于，成球培养的细胞为以下一种：
(1)肿瘤细胞；
(2)肿瘤细胞与肿瘤组织周边细胞的混合；
(3)免疫细胞。
10.根据权利要求9所述细胞成球培养方法，其特征在于，肿瘤组织周边细胞为以下至少一种：成纤维细胞、巨噬细胞。
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