[发明专利]一种同时检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法

说明书

本发明公开一种同时检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，采用超声辅助提取法对黑蒜进行提取，得提取液；所得提取液经固相萃取后进行PITC衍生化，衍生化处理后得样品液；对所得样品液进行UPLC‑MS检测，经计算分别得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量。

技术领域

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种UPLC-MS(超高效液相色谱-单四级杆质谱法)结合柱前衍生化同时检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法。

背景技术

黑蒜又名黑大蒜、发酵黑蒜，是由新鲜生蒜为原料，在高温高压的环境中发酵而来的大蒜深加工制品。大蒜发酵完成后，其蒜瓣变为黑褐色，刺激性气味和辛辣感消失，口感软糯、香甜。大量研究表明，同大蒜相比，发酵后的黑蒜生物活性增强，且多种营养物质含量增加，具有抗氧化、抗肿瘤、保护肝脏、调节血糖血脂水平、抗过敏、抗炎等生理功能。

硒是人体必需的微量元素之一，参与了人体多项生理活动过程，对人体健康十分重要。硒摄入量不足，会使人体免疫力下降，引起多种疾病，如：克山病、大骨病、地方性心肌炎等，硒过量则会导致人体中毒。因此，人体及时补充适量的硒是至关重要的。硒分为无机硒和有机硒，有机硒因低毒性、高生物活性，更适合人体吸收利用。从植物中获取硒，是目前公认的人体摄取硒的最主要途径。植物中的有机硒主要以硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸的形式存在。黑蒜因含硒而成为大众青睐的补硒食物之一，因此能够快速准确检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸的含量，可以为黑蒜质量和安全性评价提供重要参考依据。

目前，硒代蛋氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸的检测方法主要有气相色谱-质谱法、液相色谱-原子荧光光谱法、高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法。目前，尚未见黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸PITC衍生化检测的方法。

发明内容

本发明提供一种同时检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，本发明拟通过优化提取、萃取、衍生化条件参数，建立一种基于柱前PITC衍生化的高效液相色谱-单四级杆质谱法，同时快速检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量，并对5个不同产地黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量进行分析，为黑蒜质量提供参考依据。

一种同时检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，包括：

(1)将黑蒜去皮、均匀碾压成泥状后真空干燥；取干燥后的黑蒜并按比例加入甲醇水溶液，充分混匀后在20～50℃下超声10～40min；离心分离后取上清液；

(2)将所得上清液经固相萃取并以甲醇水溶液进行洗脱，收集所有洗脱液；将所得洗脱液旋蒸浓缩后再次溶解于甲醇水溶液中，混匀后过滤取滤液(提取液)；

(3)向所得滤液(提取液)中加入内标溶液、三乙胺乙腈溶液以及PITC乙腈溶液，充分混匀后20～60℃进行衍生化反应1～3h；反应结束后取上清液于自动进样瓶，待测；；

(4)将所得待测样品液进行UPLC-MS检测，记录吸收峰面积并代入标准曲线，计算得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸各自的含量。

本发明的方法，采用超声辅助提取法对黑蒜进行提取，得提取液；所得提取液经固相萃取后进行PITC衍生化，衍生化处理后得样品液；对所得样品液进行UPLC-MS检测，经计算得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量。

可选的，步骤(1)中，所述甲醇水溶液为体积百分比为0～80％的甲醇水溶液；黑蒜与甲醇水溶液的质量体积比为1g:10～25mL。

可选的，步骤(2)中，所述甲醇水溶液为体积百分浓度为10～80％的甲醇水溶液。

可选的，步骤(1)中，所述甲醇水溶液为体积百分浓度为20％的甲醇水溶液；黑蒜与甲醇水溶液的质量体积比为1g:10mL；充分混匀后在40℃下超声30min；步骤(2)中，所述甲醇水溶液为体积百分浓度为40％的甲醇水溶液。