[发明专利]一种血液中钙卫蛋白含量的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种血液中钙卫蛋白含量的检测方法及检测试剂盒。本发明的检测方法利用抗原抗体结合法对待测样本中的钙卫蛋白进行富集后，采用液相色谱‑串联质谱法进行分析。本发明的检测方法具有很高的灵敏度，覆盖了健康人至病毒感染者的含量全范围。本发明的检测方法前处理操作简单，缩短了分析时间，提高分析速度。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种血液中钙卫蛋白含量的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

钙卫蛋白是一个分子量为36 kD、含量丰富的钙、锌结合蛋白，属子S100家族，是由两条分子量为14 kD的重链（S100A9）和一条分子量为8 kD的轻链（S100A8）以共价键连接钙离子形成的异三聚体。钙卫蛋白占总蛋白的5%及中性粒细胞胞浆蛋白的45%，具有抗菌及抗真菌特点，在许多炎症情况下升高，如关节炎、慢性阻塞性肺疾病（COPD）和炎症性肠病（IBD），是IBD诊断的最强的独立预测因素，结合其他血液生物标志物还能准确预测IBD炎症负担，并有预测疾病和其转归的潜力，目前钙卫蛋白检测已成为IBD治疗疗效判断的“金标准”。

钙卫蛋白广泛分布于人体组织、体液及细胞中，不同部位的钙卫蛋白含量不同，粪便中钙卫蛋白含量最高，因此成为目前最常用的检测基质，但粪便钙卫蛋白检测时存在病人依从性差、检测结果不稳定等缺点，因此国内外研究者们开始尝试使用血清作为检测钙卫蛋白含量测定的基质。

对于大分子蛋白的定量检测，一直以来是传统的方法如酶联免疫法、化学发光法、乳胶比浊法为主。传统的基于抗原抗体结合的原理实现定量测定的方法难以避免与结构相似蛋白的非特异性结合的问题，因此结果准确度低，难以准确赋值。并且，由于血浆中钙卫蛋白的含量偏低，例如，健康成人血浆钙卫蛋白的含量为0.1 ~ 0.6 ng/μL，病毒感染者的含量为0.1 ~ 11.4 ng/μL；细菌感染者为0.6 ~ 11.0 ng/μL。因此，对血浆中钙卫蛋白含量测定的灵敏度要求较高。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种血液中钙卫蛋白含量的检测方法及检测试剂盒。

本发明提供了一种血液中钙卫蛋白含量的检测方法，利用抗原抗体结合法对待测样本中的钙卫蛋白进行富集后，采用液相色谱-串联质谱法进行分析。

其中，检测方法至少包括以下步骤：

S1、制备标准曲线方程，包括：

S11、配制梯度浓度的标准工作液、内标工作液；标准工作液中含有钙卫蛋白重组蛋白标准品，内标工作液中含有至少两种特征肽段内标物；

S12、配制标准溶液：将梯度浓度的标准工作液中分别加入空白血浆基质，获得系列浓度的标准溶液；

S13、利用抗原抗体结合法对系列浓度的标准溶液中的钙卫蛋白重组蛋白进行富集，得到系列浓度的标准溶液富集液；

S14、对系列浓度的标准溶液富集液进行前处理，得到浓度的标准溶液上样液；

S15、利用高效液相色谱质谱联用仪对标准溶液上样液进行检测，获得标准曲线方程；

S2、处理得到待测样品上样液，包括：

S21、利用抗原抗体结合法对待测样品进行富集，得到待测样品富集液；

S22、对待测样品富集液进行前处理，得到待测样本上样液；

S3、检测待测样品，包括：使用高效液相色谱质谱联用仪对待测样本上样液中的至少两种特征肽段进行检测，将定量肽段检测结果代入标准曲线方程，得到待测样本中钙卫蛋白的浓度。

本发明还提出一种定量检测血液中钙卫蛋白的试剂盒，包括以下组份：