[发明专利]阿美替尼耐药细胞株NCI-H1975-AR及其应用

说明书

本发明属于医药生物技术领域，具体公开了一种阿美替尼耐药细胞株，其特征在于，所述阿美替尼耐药细胞株为耐阿美替尼人肺腺癌细胞株NCI‑H1975‑AR，保藏编号为CCTCC NO:C2022291。该耐药细胞株H1975‑AR可在作用浓度为1umol/L阿美替尼的培养体系中稳定生长、传代，对阿美替尼的耐药指数（RI）为522.8，而且，该H1975‑AR细胞株存在T790M突变，无C797S突变，并表现出上皮间质转化的表型；因此，本发明构建的耐阿美替尼人肺腺癌细胞株H1975‑AR为研究阿美替尼耐药人非小细胞肺癌细胞形态学及生物学特点、非小细胞肺癌对阿美替尼的耐药机制、非小细胞肺癌耐药相关信号通路的研究分析、抗肿瘤药物敏感性分析、制备抗肿瘤药物、筛选肿瘤耐药逆转药物、研究更有效的肿瘤治疗方法等提供了耐药细胞模型，具有较高的科研和生产应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域。具体涉及一种阿美替尼耐药细胞株H1975-AR及其应用。

背景技术

肺癌是世界范围内最常见且死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中80％的病例为非小细胞肺癌。由于肺癌本身的疾病特性，导致超过一半的肺癌患者在疾病确诊时已发生转移，失去了手术根治的机会，其生存率也大大减低。近十年来，随着分子诊断技术的发展和靶向药物的研发，肺癌的治疗模式已经不在局限于传统的化疗，其五年生存率也有明显的改善。其中，EGFR-TKI治疗在具有EGFR基因激活突变的肺癌人群中疗效显著。

EGFR激活突变导致EGFR酪氨酸激酶结构域构象不稳定而发生二聚体化，进而激活其下游信号通路，促进肿瘤细胞生长增殖，侵袭迁移及血管生成而导致肿瘤发生发展。EGFR-TKIs则可通过结合EGFR激酶结构域的ATP结合位点从而抑制其活动。目前EGFR-TKIs治疗为具有EGFR突变的肺腺癌患者的一线标准治疗，其中包括一代EGFR-TKIs(吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼)，二代EGFR-TKIs(阿法替尼、达克替尼)和三代EGFR-TKI(奥希替尼、伏美替尼、阿美替尼)。但所有患者仍然不可避免的产生耐药。

阿美替尼是一种新型、不可逆、高选择性的，对于EGFR敏感突变和T790M突变具有抑制作用的第三代EGFR-TKI。APOLLO临床研究结果显示阿美替尼用于晚期一代或二代EGFR-TKIs治疗后进展的T790M阳性的NSCLC患者的安全有效。目前，阿美替尼已应用于临床晚期EGFR突变患者的二线治疗，但阿美替尼用于二线治疗的耐药机制尚不完全清楚，而且，目前国内外尚未有阿美替尼耐药的肺腺癌细胞株的报道。

发明内容

针对现有技术中存在的问题和不足，本发明的目的旨在提供一种阿美替尼耐药细胞株H1975-AR及其应用。

为实现发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供了一种阿美替尼耐药细胞株H1975-AR，命名为耐阿美替尼人肺腺癌细胞株NCI-H1975-AR，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2022年9月7日，保藏编号为CCTCC NO:C2022291，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学。

耐阿美替尼人肺腺癌细胞株NCI-H1975-AR是采用体外浓度梯度递增法，即通过逐步增加阿美替尼药物浓度，持续作用于具有EGFR21外显子L858R突变及T790M突变的NCI-H1975细胞株，诱导建立人肺腺癌阿美替尼耐药细胞株。其具体构建方法为：

(1)将人源具有EGFR21外显子L858R突变及T790M突变的肺腺癌细胞株NCI-H1975(本实验室库存)置于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，于37℃、5％ CO₂、饱和湿度的培养箱中培养，并使用胰蛋白酶消化液(0.25％Trypsin-EDTA)消化传代；