[发明专利]一种葛根外泌体样纳米颗粒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术和生物工程领域，具体的说是涉及一种葛根外泌体样纳米颗粒及其制备方法和应用。所述葛根外泌体样纳米颗粒采用溶液浓度梯度离心法对粗制的葛根外泌体样纳米颗粒进行提纯，得到高纯度的葛根外泌体样纳米颗粒。所述葛根外泌体样纳米颗粒可显著提高乙醛脱氢酶的量及活性，并可显著提高醉酒时间，缩短醒酒时间，成分天然，无毒副作用。

技术领域

本发明涉及生物技术和生物工程领域，具体的说是涉及一种葛根外泌体样纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

长期大量饮酒引起的酒精性肝脏疾病(Alcoholic Liver Disease,ALD)，主要病症表现为肝脏脂肪病变、炎症病变及细胞器质病变等，此类肝脏损伤早期常表现为肝脏脂肪堆积导致的脂肪肝(Alcoholic Fatty Liver,AFL)，不加控制则进一步发展为肝脏酒精性炎症甚至肝细胞纤维病变乃至硬化，继续严重酗酒则可引发大面积肝细胞坏死甚至肝脏功能衰竭。目前市面及临床研究领域内，都没有明确研究证明能提高乙醛脱氢酶的量或活性的解酒醒酒药物，有一类化学成分药物如纳络酮、利尿剂等，其中纳洛酮也能解除酒精的中枢抑制、缩短昏迷时间，但这是阿片类药物过量的解毒剂，所以起不到真正解酒的作用。

葛根和葛花作为传统的醒酒草药，其醒酒解酒研究较为广泛，对其作用效果及作用原理较为深入。葛花、葛根及总黄酮类物质不仅可以保护中枢神经系统、解酒毒护肝脏，还具有潜在的戒酒能力。然而，在从植物中提取的纳米颗粒中还没有建立系统囊泡特异性标记，因此，根据2018年国际细胞外囊泡学会的立场声明和MISEV2014指南，将这些植物提取的纳米颗粒通常被称为外泌体样纳米颗粒，或囊泡状纳米颗粒。葛根外泌体样纳米颗粒是否具有任何功能，目前还没有定论。因此，本申请对葛根外泌体样纳米颗粒在解酒醒酒应用方面进行了深入的研究，证实其具有醒酒解酒的作用并成功获得高纯度的葛根外泌体样纳米颗粒。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种精制葛根外泌体样纳米颗粒的方法，以提高葛根外泌体样纳米颗粒的纯度。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

所述精制葛根外泌体样纳米颗粒的方法在于：采用溶液浓度梯度离心法对粗制的葛根外泌体样纳米颗粒进行提纯，具体步骤为：

以从高到低不同浓度的浓度梯度溶液铺溶液垫；

将粗制的葛根外泌体样纳米颗粒上清-沉淀预混液缓慢地注入到所述溶液垫中，通过离心获得精制的葛根外泌体样纳米颗粒。

进一步的，所述葛根外泌体样纳米颗粒上清-沉淀预混液中粗制的葛根外泌体样纳米颗粒的制备方法为：

新鲜葛根洗净后打碎至肉松状，加入PBS缓冲液混匀后孵育过夜，过夜后的混合液通过过滤和离心制得粗制的葛根外泌体样纳米颗粒；

所述过滤包括依次的双层医用纱布过滤和0.22μm过滤器过滤。

进一步的，所述葛根材料与PBS缓冲液的重量比为1:1.5-2。

优选的，所述葛根材料与PBS缓冲液的重量比为1:1.5。

进一步的，葛根外泌体样纳米颗粒提取过程中所采用离心的温度为4℃，转速为2000-150000xg，时间为30-120min。

进一步的，所述溶液为蔗糖、碘克沙醇或氯化铯溶液中的一种，所述溶液垫的浓度梯度从低到高依次为8％、30％、45％以及60％。

进一步的，所述葛根外泌体样纳米颗粒上清-沉淀预混液中所用上清部分为制备粗制的葛根外泌体样纳米颗粒过程中，通过离心分离出的上清液，上清液中含有大量的色素。

进一步的，离心后的所述浓度溶液垫中存在2条葛根外泌体样纳米颗粒的条带。

本发明申请的目的之一在于提供一种葛根外泌体样纳米颗粒以及其应用。