[发明专利]人乳头瘤病毒HPV39 L1蛋白的表达和类病毒样颗粒及其制备方法

权利要求书

1.一种截短的HPV39型L1蛋白，其是在野生型HPV39型L1蛋白的基础上，在其N端截短不多于10个氨基酸，优选9个氨基酸，且在其C端截短不多于30个氨基酸，优选29个氨基酸；优选地，截短的HPV39型L1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码如权利要求1所述的截短的HPV39型L1蛋白的核酸；优选地，其经过密码子优化的核酸；更优选地，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.含有SD序列和编码如权利要求2所述的截短的HPV39型L1蛋白的核苷酸序列的核酸，优选地，所述SD序列的核苷酸序列为5`-AGGAGATATA-3`。

4.含有如权利要求2或3所述的编码核酸的表达盒或表达载体。

5.如权利要求4所述的表达盒或表达载体，其特征在于，其是原核表达载体，更优选地是在载体pGEX基础上去除了GST标签序列，并且整合所述SD序列的截短的HPV39型L1蛋白的核酸分子而得到。

6.含有如权利要求2或3所述的编码核酸的表达盒或表达载体的重组宿主细胞。

7.如权利要求6所述的重组宿主细胞，其特征在于，其是原核细胞，优选为大肠杆菌。

8.一种表达如权利要求1截短的HPV39型L1蛋白的方法，其特征在于，培养如权利要求6或7所述的重组宿主细胞以产生HPV39型L1蛋白，任选地，包括纯化步骤，优选地所述纯化步骤为：取所述的重组宿主细胞的菌体用破菌缓冲液充分重悬，然后用高压均质机对菌体进行高压破碎，离心收集上清；上清进一步通过硫酸铵沉淀，硫酸铵的最终饱和度为30%，沉淀复溶后再次离心收集上清获得粗纯液；

粗纯液先上样进行Superdex200分子筛层析，根据L1目的蛋白的出峰位置收集其所在组分；

接着将分子筛收集样品上样进行Source15Q阴离子交换层析，通过NaCl线性洗脱收集L1目的蛋白所在组分，得到HPV39型L1蛋白。

9.一种表达如权利要求1截短的HPV39型L1蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：根据如权利要求8所述的方法得到的HPV39型L1蛋白的步骤，调节其所在缓冲液的pH和盐浓度，使其自组装形成VLP。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述缓冲液包括但不限于Tris缓冲液，磷酸盐缓冲液，醋酸缓冲液，HEPES缓冲液，MOPS缓冲液，枸橼酸缓冲液、组氨酸缓冲液，硼酸缓冲液，优选磷酸盐缓冲液；

缓冲液的pH在4.75-5.25，盐浓度在2.0-4.0M之间，优选pH4.75，pH5.0，pH5.25；其中的盐浓度在2.0-4.0M之间，优选2.0M，2.5M，3.0M，3.5M，4.0M；

任选地，还包括纯化所得HPV39L1五聚体的步骤。