[发明专利]一种促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备自体牙囊源间充质干细胞和牙髓源间充质干细胞：

将牙囊和牙髓组织分别剪碎，清洗，离心，去除上清液；将处理过的牙囊和牙髓组织分别用无血清培养基重悬后，接种进行培养，至细胞融合度为45～55％，得到原代牙囊细胞和原代牙髓细胞，分别传代培养，获得牙囊源间充质干细胞和牙髓源间充质干细胞；

(2)制备牙髓源间充质干细胞外囊泡：

将步骤(1)所得牙髓源间充质干细胞接种培养，然后清洗后将细胞转入无血清诱导培养基中培养，经多次清洗后取沉淀，获得牙髓源间充质干细胞外囊泡；

(3)诱导牙囊源间充质干细胞：

复苏牙囊源间充质干细胞，传代培养后，在牙囊源间充质干细胞培养体系中加入牙髓源间充质干细胞外囊泡，进行诱导培养，待细胞融合度达到85％-95％收获细胞，制成牙囊源间充质干细胞悬液。

2.根据权利要求1所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)牙囊和牙髓组织被剪碎后的体积为0.001～75mm³，离心速度为1000～1200r/min，时间为5～8min。

3.根据权利要求2所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)牙囊和牙髓组织被剪碎后的体积为1mm³，离心的速度为1000r/min，时间为5min。

4.根据权利要求1所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)牙囊和牙髓组织在温度为36～38℃，二氧化碳的体积分数为4～6％的环境下进行培养，每隔3～5天更换一次培养液。

5.根据权利要求1所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)牙囊和牙髓组织在温度为37℃，二氧化碳的体积分数为5％的环境下进行培养，每隔4天更换一次培养液。

6.根据权利要求1所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中接种培养的密度为5000～10000个/cm²。

7.根据权利要求6所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中接种培养的密度为10000个/cm²。

8.根据权利要求1所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)获得牙髓源间充质干细胞外囊泡后在温度为-85～-80℃的环境下保存。

9.根据权利要求1或8所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)获得牙髓源间充质干细胞外囊泡后在温度-80℃的环境下保存。

10.根据权利要求1所述的促进成骨分化的牙囊源间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)牙囊源间充质干细胞传代培养至3～5代。